网状内皮组织增生病病毒反向遗传操作系统的建立  

Construction of an infectious molecular clone of Reticuloendotheliosis virus

作　　者：邓小芸[1,2,3] 祁小乐[1] 高玉龙[1] 高宏雷[1] 秦立廷[1] 高立[1] 王永强[1] 王笑梅[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001 [2]东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030 [3]黑龙江畜牧兽医职业学院,黑龙江双城150111

出　　处：《中国预防兽医学报》2010年第9期659-663,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：现代农业产业技术体系建设专项基金(NYCYTX-42-G3-01);公益性行业(农业)科研专项经费(200803020-03)

摘　　要：为建立网状内皮组织增生病病毒(REV)的反向遗传操作系统,本研究分别以6个含有连续并且部分重叠的REV HLJR0901株基因组片段的重组质粒为模板,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)和酶切拼接将HLJR0901的全基因组克隆于pBluescriptⅡ载体中,并在基因组中通过改变核苷酸(C2250G)消除了其中的MscⅠ酶切位点作为分子标签,构建了REV感染性分子克隆pBlu-mHLJR0901。测序结果表明,REV HLJR0901株前病毒DNA全长为8284bp。将pBlu-mHLJR0901转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒拯救,间接免疫荧光、PCR、测序及电镜观察表明拯救出REV。其拯救的REV在CEF细胞上具有与亲本毒相似的复制特性。该反向遗传操作系统的建立为REV的深入研究提供了有效的技术操作平台。To develop a reverse genetics system of Reticuloendotheliosis virus （REV）,a full-length infectious clone （pBlu-mHLJR0901） was constructed by cloning six overlapping PCR fragments covering the entire genome of the northeast China REV strain HLJR0901. The infectious clone was 8,284 bp in length and contained the genetic marker created by C2250G mutation to inactivate the original MscⅠ site. The pBlu-mHLJR0901 was transfected in chick embryo fibroblast,and the rescued REV was detected by indirect immunofluorescence,PCR and electron microscope assay. The TCID50 of the rescued REV was 105.2/mL,which was similar to the parental strain.

关 键 词：网状内皮组织增生病 感染性分子克隆 病毒拯救 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]