双重RT-PCR方法检测猪流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒  

Establishment of a duplex RT-PCR for the detection of swine influenza virus and porcine reproductive and respiratory syndrome virus

作　　者：罗俊[1,2] 刘业兵[1] 陈坚[1,3] 宁宜宝[1] 

机构地区：[1]中国兽医药品监察所,北京100081 [2]北京信得威特科技有限公司,北京100302 [3]广东永顺生物制药有限公司,广东广州511356

出　　处：《中国预防兽医学报》2010年第9期687-690,共4页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：2010年公益性行业(农业)科研专项(201003010-3);"十一五"国家科技支撑计划(2007BAD86B04-4)

摘　　要：为建立特异、敏感的猪流感病毒(SIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的双重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank登录的SIVM基因保守序列和PRRSV美洲型毒株的N基因保守序列,设计合成了2对特异引物,通过对扩增条件的优化,建立检测SIV和PRRSV的双重RT-PCR方法。检测结果显示:该方法可同时扩增出SIV(345bp)和PRRSV(520bp)的特异性片段;而猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型及阴性鸡胚尿囊液核酸扩增结果均为阴性;对SIV和PRRSV2种病毒混合液的最小检出量分别为102EID50/0.1mL和103TCID50/0.1mL。应用双重RT-PCR和病毒分离法对12份临床疑似样品进行对比检测,结果表明:除双重RT-PCR检测到双阳性的3份混合感染病料中1份未分离到PRRSV外,其余2份均分离出病毒。证明该方法具有良好的特异性、敏感性,可以用于临床样品的早期快速检测。A duplex RT-PCR assay for swine influenza virus （SIV） and porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV） were developed by using two pairs of primers derived from the M gene of SIV and N gene of PRRSV America strain. The assay was shown to specifically amplify a 325 bp fragment from SIV and 520 bp from PRRSV,whereas no PCR products could be amplified from Classical swine fever virus,pseudorabies virus,porcine parvovirus,porcine circovirus 2 and normal chick embryo allantoic fluid. It was sensitive and could be detect 103 TCID50/0.1 mL PRRSV and 102 EID50/0.1 mL SIV in a mixed sample. Therefore the duplex RT-PCR assay developed here could be an effective method for rapid detection of clinical SIV and PRRSV.

关 键 词：猪流感病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 双重RT-PCR 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]