96孔板-PCR排除法筛选猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因  

Identification of vitellogenin gene from female Ascaris suum cDNA library using a PCR-based screening method

作　　者：魏冬霞[1,2] 邓艳 吴绍强[4] 林瑞庆[2] 宋慧群[2] 朱兴全[2] 

机构地区：[1]江苏畜牧兽医职业技术学院动物医学院,江苏泰州225300 [2]华南农业大学兽医学院,广东广州510642 [3]广州机场出入境检验检疫局综合实验室,广东广州510470 [4]中国检验检疫科学研究院,北京100029

出　　处：《中国预防兽医学报》2010年第9期731-733,共3页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金项目(30671578)

摘　　要：为了从猪蛔虫雌虫cDNA文库中筛选出猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因,本研究根据猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因的EST序列为模板设计引物,采用96孔板-PCR排除法对猪蛔虫雌虫cDNA文库进行筛选,并筛选出阳性克隆F993-G10-A10。测序结果表明,该基因序列长621bp,有完整的3'端。经BLAST分析,其推导的氨基酸序列与秀丽隐杆线虫(C.elegans)的卵黄蛋白原基因(Vit1、Vit2、Vit3、Vit4和Vit5)的氨基酸序列的一致性分别为35%、35%、34%、34%和35%,核苷酸序列相似性分别为55%、57%、54%、54%和53%。该阳性克隆的获得为该基因的深入研究奠定了基础。同时也证明了96孔-PCR排除法是一种高效、简便、低成本的筛选文库方法。The vitellogenin gene of female Ascaris suum was identified from a female A. suum specific subtractive cDNA library by PCR-based screening method using primers derived froma female A. suum-specific EST sequences. A positive clone F993-G10-A10 was obtained and sequenced. This clone contained 621 bp nucleotide encoding a protein homologous to the vitellogenin structural protein （yolk protein） family （Vit1,Vit2,Vit3,Vit4 and Vit5） in Caenorhabditis elegans,and shared 35%,35%,34%,34% and 35% amino acid identities with proteins,respectively. The PCR-based screening method was effective,simple and rapid for identifying genes from cDNA libraries.

关 键 词：旋猪蛔虫 卵黄蛋白原基因 96孔板-PCR排除法 文库筛选 

分 类 号：S855.9[农业科学—临床兽医学]