正交设计优化日本落叶松SRAP-PCR反应体系  

Optimization for SRAP-PCR System of Larix kaempferi(Lamb.)Carr.Using Orthogonal Design

作　　者：汪成成[1] 崔文山[1] 董健[2] 冯健[2] 王骞春[2] 姜韬[1] 闫文文[1] 张璐[1] 

机构地区：[1]沈阳农业大学林学院,沈阳110866 [2]辽宁省林业科学研究院,沈阳110032

出　　处：《沈阳农业大学学报》2010年第4期444-448,共5页Journal of Shenyang Agricultural University

基　　金："十一五"国家科技支撑计划项目(2006BAD01A1401);辽宁省科技厅攻关项目(2008207001)

摘　　要：利用正交设计L16(45)对日本落叶松SRAP-PCR反应体系的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶浓度五因素在四个水平上进行优化试验,PCR结果采用统计软件SPSS13.0进行分析,结果表明:各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中模板DNA影响最大;筛选得到日本落叶松SRAP-PCR反应的最佳体系(20μL)为模板DNA浓度为120ng.20μL-1,dNTPs的浓度为0.15mmol·L-1,引物浓度为0.3μmol·L-1,Mg2+浓度为1.5mmol·L-1,Taq酶浓度为0.5U.20μL-1。这一优化体系的建立为今后利用SRAP标记技术对日本落叶松遗传多样性的研究奠定基础。The orthogonal design was used to optimize SRAP-PCR amplification system on Larix kaempferi（Lamb.）Carr.in four leveles of five factors（DNA template,Mg2＋,dNTPs,primer,Taq DNA polymerase） respectively.The result of PCR was analyzed with software SPSS13.0.The affections of each factor in different levels were found and the most effective factor to the result of PCR was the DNA template.A most suitable SRAP-PCR system for Larix kaempferi（Lamb.）Carr.was established,it＇s 20μL reaction system with 120ng·20μL-1 DNA template,0.15mmol·L-1dNTPs,0.3μmol·L-1 primer,1.5 mmol·L-1 Mg2＋ and 0.5U·20μL-1 Taq DNA polymerase.This optimized system for SRAP marker would be useful in the study on the genetic diversity of Larix kaempferi（Lamb.）Carr.

关 键 词：正交设计 SRAP-PCR 日本落叶松 

分 类 号：S791.223[农业科学—林木遗传育种]