PTEN基因重组慢病毒的构建  

作　　者：陈玲娜[1] 蒋磊[2] 谷杭芝[1] 郑飞云[1] 

机构地区：[1]温州医学院附属第一医院妇科,325000 [2]温州医学院附属第一医院医科所,325000

出　　处：《实用医学杂志》2010年第23期4296-4299,共4页The Journal of Practical Medicine

基　　金：浙江省教育厅科研项目(编号:Y200906317);温州市科技计划项目(编号:Y20080133)

摘　　要：目的:构建PTEN基因重组慢病毒,转染真核细胞Ishikawa并检测PTEN基因在真核细胞内的表达。方法:分子克隆重组人PTEN基因与含有CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体PLIG,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。将重组子PLIG-PTEN和包装质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,感染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,观察慢病毒表达载体所携带的GFP基因在细胞内的表达,使用RT-PCR和western-blot检测PTEN基因在细胞内的表达水平。结果:PCR和测序证实,成功克隆慢病毒载体PLIG-PTEN,包装慢病毒,感染真核细胞Ishikawa后48h,观察到绿色荧光的广泛表达并检测出宿主细胞内表达的PTEN mRNA成功表达PTEN蛋白。结论:本实验成功地构建了人PTEN基因慢病毒载体,并观察到PTEN基因在真核细胞中的成功表达。

关 键 词：慢病毒属 PTEN ISHIKAWA细胞 

分 类 号：R73-3[医药卫生—肿瘤]