以绿荧光蛋白基因为报告基因的广宿主启动子探针载体的构建和应用  

CONSTRUCTION OF A GFP BROAD HOST RANGE PROMOTER PROBE VECTOR AND ITS APPLICATION

作　　者：马立新[1] 史巧娟[2] 周俊初[2] 陈华癸[2] 

机构地区：[1]湖北大学生命科学院 [2]农业部农业微生物重点实验室,华中农业大学武汉430070

出　　处：《微生物学报》1999年第5期408-415,共8页Acta Microbiologica Sinica

基　　金：国家863 高技术研究发展计划;国家自然科学基金

摘　　要：将以绿荧光蛋白基因（ ｇｆｐ） 的ｃＤＮＡ 为模板，用人工合成引物经ＰＣＲ 扩增获得的０－９ｋｂＤＮＡ 片段克隆到表达载体ｐＥＴ１１Ｃ 上构建成ｇｆｐ 表达载体ｐＨＮ１１５ 。从ｐＨＮ１１５ 上切下的不含启动子，但保留了ＳＤ 序列的ｇｆｐ 基因经克隆载体ＳＫ（ ＋ ） 和ｐＩＪ２９２５ 亚克隆后再克隆到广谱稳定性质粒ｐＴＲ１０２ 上构建成广谱、稳定、可视的启动子探针载体ｐＨＮ１２７ 。并用它从费氏中华根瘤菌ＨＮ０１ 的总ＤＮＡ 中成功地钓出组成型和诱导型表达的启动子。The 0-9 kb DNAfragment was obtained by PCRand using a pair ofspecial de signed primersfrom thegreenfluorescentprotein gene(gfp) .It Wasthen clonedintoan ex pression vector pET 11Cand named as pHN115 .Apromoferless gfp vector with SDfrag ment was obtained from pHN115 and subcloned into SK( + ), pIJ2925 and finally into pTR102 .Abroad hast rangeand visible promoter probe vector,pHN127 wasconstrctedand used successfullyfortheidentification ofconstitutive andinducible promotersfrom Sinorhi zobium fredii HN01 .

关 键 词：绿荧光蛋白基因 中华根瘤菌 启动子 探针载体 

分 类 号：Q782[生物学—分子生物学] Q933