PCGF1蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定  

Protein expression,purification of PCGF1 and its monoclonal antibody preparation and identification

作　　者：李辉[1] 吴旭东[2] 龚燕华[2,3] 阴彬[2] 

机构地区：[1]武警医学院组织学与胚胎学教研室,天津300162 [2]中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室,北京100005 [3]武警医学院生物化学教研室,天津300162

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2011年第1期71-73,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金面上项目(30971614);医学分子生物学国家重点实验室外部课题(2010年)

摘　　要：目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128/189融合蛋白(简写为His-N128/189)的原核表达。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和层析纯化。用所获得的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,分别通过ELISA和Western blot法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定mAb的Ig亚类。取1株杂交瘤细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore公司的mAb纯化试剂盒纯化mAb,用Western blot法检测mAb的效价。结果:表达纯化了重组人His-N128/189蛋白;筛选出2株可稳定分泌特异性抗人PCGF1 mAb的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得高效价(1∶6000)、高特异性的鼠抗人PCGF1 mAb。结论:原核表达的PCGF1片段融合蛋白可以被纯化,并具有足够的蛋白免疫原性,所制备的相应mAb可特异识别内源性和外源性PCGF1蛋白,可以运用于PCGF1基因功能的研究。AIM： To express the human recombinant PCGF1 protein and prepare monoclonal antibody （mAb） against it. METHODS： The recombinant expression plasmid pET32a-His-PCGFl-128/189 was made and transformed into E. coil （ BL21 ）, and then the recombinant fusion protein His-PCGF1-128/189 was expressed and purified. The BALB/c mice were immuned with purified protein HisPCGFl-128/189 as antigen.

关 键 词：PCGF1 单克隆抗体 杂交瘤技术 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]