结肠癌细胞体外模拟缺氧的相关研究  

Changes in the biological behaviors of colon cancer cells under simulated hypoxia in vitro

作　　者：青青[1] 王媛媛[1] 张绍衡[1] 青海涛[1] 王亚东[1] 陈楚弟[1] 肖冰[1] 

机构地区：[1]南方医科大学南方医院消化科,广东省胃肠疾病重点实验室,广东广州510515

出　　处：《南方医科大学学报》2011年第1期133-137,共5页Journal of Southern Medical University

基　　金：广州市科技计划项目(2008-SZ-29)

摘　　要：目的研究结肠癌细胞SW480与CD133+SW480肿瘤干细胞亚群对CoCl2模拟缺氧的反应性,及缺氧后抗凋亡、血管生成等相关基因mRNA水平表达的变化。方法 Western blotting比较SW480经不同浓度、不同时间CoCl2模拟缺氧后缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的差异;免疫磁珠分选(MACS)CD133+SW480肿瘤干细胞亚群,流式细胞术检测其中CD133+细胞比例,选取稳定SW480细胞HIF-1α表达的最佳CoCl2浓度和时间作用后,Western blotting比较SW480细胞与CD133+SW480肿瘤干细胞亚群HIF-1α的表达差异;观察缺氧对肿瘤干细胞球形成和增殖能力的影响;实时定量PCR比较SW480经CoCl2模拟缺氧后结肠癌干细胞表面标志CD133(PROM1)、抗凋亡基因survivin、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平表达的差异。结果 SW480细胞经200μmol/L CoCl2模拟缺氧8 h,HIF-1α表达量最高;经MACS分选所得CD133+SW480细胞中,CD133+细胞比例为85.56±0.89%;CD133+SW480亚群200μmol/L CoCl2模拟缺氧8 h未见HIF-1α表达;CoCl2模拟缺氧培养后CD133+SW480肿瘤干细胞亚群无血清培养肿瘤干细胞球形成率较常规培养明显增强;SW480经CoCl2模拟缺氧其CD133、survivin、VEGF等mRNA表达分别升高1.607±0.103倍(P<0.05)、2.745±0.370倍(P<0.05)、3.798±0.091倍(P<0.05)。结论 (1)CoCl2能够在体外模拟结肠癌细胞缺氧,稳定HIF-1α的表达;(2)结肠癌细胞模拟缺氧后HIF-1α的表达与CoCl2呈浓度和时间依赖性;(3)CD133抗体标记免疫磁珠分选SW480细胞后,CD133+SW480细胞有较高得率和细胞活性;(4)缺氧可使肿瘤干细胞球形成能力增强,CD133+SW480肿瘤干细胞亚群较普通SW480更能够耐受缺氧,肿瘤干细胞具有不同于普通肿瘤细胞的特殊生物学特性;(5)缺氧可改变肿瘤细胞表型,促进其向肿瘤干细胞转化,并能够增强肿瘤抗凋亡能力和血管形成能力。Objective To investigate the reactivity of colon cancer cell line SW480 and CD133＋SW480 subsets to hypoxia in vitro and the changes in the expressions of anti-apoptosis and angiogenesis genes. Methods SW480 cells was subjected to CoC12 exposure at varying concentrations and for different time lengths to induce hypoxia, and the protein expression of hypoxia induced factor la （HIF-la） was detected by Western blotting.

关 键 词：结肠癌细胞 肿瘤干细胞 氯化钴 缺氧 抗凋亡 血管形成 

分 类 号：R730.2[医药卫生—肿瘤]