bcl-x选择性剪接微基因报告方法的建立  

作　　者：黄波[1] 王小中[1] 王彩纹[1] 李静[2] 章海斌[1] 熊火梅[1] 肖芸[1] 余佳 

机构地区：[1]南昌大学第二附属医院检验科,南昌330006 [2]南昌大学第一附属医院检验科,南昌330006 [3]IL 60611,Chicago,USA,Department of Dermatology,Feinberg School of Medicine,Northwestern University

出　　处：《第三军医大学学报》2011年第2期210-213,共4页Journal of Third Military Medical University

基　　金：国家自然科学基金(30700338)

摘　　要：目的利用bcl-x微基因(minigene)构建重要顺式作用元件B2G、CRCE2的突变微基因,建立bcl-x微基因报告法并应用于bcl-x选择性剪接机制的研究。方法以构建成功的pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因为模板,利用反向PCR的方法,按碱基互补配对原则设计能让顺式元件B2G,CRCE2定点突变的引物,进行PCR反应。PCR反应结束后,用DpnⅠ对模板质粒DNA进行消化,然后使PCR产物发生自身环化反应。将环化产物转化入感受态DH5α,通过筛选并最后利用测序来鉴定所构建突变微基因成功与否。结果测序结果鉴定,所克隆的突变微基因序列碱基无一错误突变。并且在HL-60细胞中,RT-PCR实验表明bcl-x顺式作用元件B2G,CRCE2对bcl-xL/bcl-xS有一定影响,pcDNA3.1(-)-bcl-x-B2G(M)转染后RT-PCR电泳显示bcl-xS几乎消失,pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE2(M)转染后RT-PCR电泳显示bcl-xL/bcl-xS为1.6。结论成功构建及应用人类凋亡相关基因bcl-x的突变微基因,顺式作用元件B2G缺失使bcl-xS几乎消失,CRCE2突变使bcl-xL/bcl-xS上升。

关 键 词：微基因报告 微基因 突变微基因 bcl-xL/bcl-xS 选择性剪接 

分 类 号：R394-33[医药卫生—医学遗传学]