白斑综合征病毒(WSSV)和血卵涡鞕虫多重PCR检测方法的建立  

Molecular Identification of WSSV and Hematodinium sp. in Portunus trituberculatus by Multiplex PCR

作　　者：施慧[1] 许文军[1] 谢建军[1] 查智辉[2] 徐汉祥[1] 史海东 

机构地区：[1]浙江海洋学院海洋与渔业研究所,浙江省海洋水产研究所,浙江舟山316100 [2]浙江海洋学院海洋科学学院,浙江舟山316004 [3]浙江省普陀区海洋与渔业局,浙江舟山316100

出　　处：《浙江海洋学院学报（自然科学版）》2010年第6期557-561,共5页Journal of Zhejiang Ocean University(Natural Science Edition)

基　　金：浙江省科技厅科研院所公共科技服务项目(2008F4003);浙江省自然科学基金项目(Y3080181;Y3080317;Y3090402)

摘　　要：根据对虾白斑综合征病毒(WSSV)和血卵涡鞕虫在GenBank中已发表的基因序列分别设计2对引物,建立了一种同时检测WSSV和血卵涡鞕虫的多重PCR方法,即通过一次PCR反应,同时扩增WSSV和血卵涡鞕虫2种病原的核酸。应用该方法分别对已知WSSV和血卵涡鞕虫阳性的样品进行PCR扩增,分别扩增出了2条特异性带———467 bp(WSSV)和168 bp(血卵涡鞕虫),与实验设计相符,且与常规PCR检测结果一致。特异性实验结果也表明,该方法对WSSV和血卵涡鞕虫的检测均具很好的特异性,而对三疣梭子蟹其它常见病原、梭子蟹DNA样本的PCR扩增结果均为阴性。10份临床样品检测结果表明该检测结果与常规PCR检测结果符合率达到100%,说明所建立的多重PCR方法可以用于三疣梭子蟹2种病原的快速检测和鉴别诊断,对养殖三疣梭子蟹的疾病及时防控具有重要意义。This paper reports a multiplex polymerase chain reaction（PCR） for the rapid detection of WSSV and Hematodinium sp..Two sets of specific primers were designed to detect two pathogens respectively including white spot syndrome virus（WSSV）and Hematodinium sp.under a single set of reaction conditions.The DNA samples,which contained WSSV and Hematodinium sp.,could be amplified by the multiplex PCR Using these two sets of primers,yielding two sizes of specific bands 467 bp（WSSV）and 168 bp（Hematodinium sp.）.The established multiplex-PCR method was determined to be specific and sensitive for detection of WSSV and Hematodinium sp.We therefore present an effective method for the identification of WSSV and Hematodinium sp.in Portunus trituberculatus.

关 键 词：三疣梭子蟹 检测 多重PCR 对虾白斑综合征病毒 血卵涡鞕虫 

分 类 号：S945[农业科学—水产养殖]