NDPK-A C4/109/145S突变体降低磷酸转移酶活性但增加DNase活性  

NDPK-A C4/109/145S Mutant Shows Lower Phosphotransferase Activity but Higher DNase Activity

作　　者：高雪[1] 张志红[1] 吕芬[1] 钱垂文[1] 王一飞[1] 熊盛[1] 

机构地区：[1]暨南大学生命科学技术学院生物医药研究开发基地,广州510632

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》2011年第3期260-266,共7页Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology

基　　金：国家自然科学基金面上项目(No.30873082);暨南大学科研教育与创新基金(No.21610709;No.21610506)资助~~

摘　　要：核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)有广泛的生物学活性,在肿瘤转移和调控中起重要作用.单独抑制NDPK-A中任何1个Cys所形成的二硫键,不会降低NDPK-A的磷酸转移酶活性和DNase活性.本实验通过构建C4/109/145S突变体并研究其生物学效应,为NDPK-A结构与功能的研究提供参考.用定点突变法将NDPK-A的4位、109位和145位Cys突变为Ser,构建pBV220-NDPK-A C4/109/145S和pEGFP-NDPK-A C4/109/145S两种重组质粒.在大肠杆菌中高效表达NDPK-A C4/109/145S突变体,纯化后可获得均一的重组NDPK-A C4/109/145S突变体蛋白.HPLC法和DNA消化法测定发现,C4/109/145S突变体磷酸转移酶活性低于野生型NDPK-A,而DNase活性高于野生型NDPK-A.以A549细胞作为模式细胞的流式细胞仪周期检测表明,C4/109/145S突变体与野生型NDPK-A一致,均可将细胞周期延滞在S期和G2/M期.这些结果证实,NDPK-A结构异构与其磷酸转移酶活性密切相关,其酶活性至少需要1个Cys残基存在,NDPK-A结构中的二硫键也可能是其DNase活性的负调控机制之一,胞内NDPK-A的氧化还原异构可能对细胞周期无显著影响.Nucleoside diphosphate kinase A（NDPK-A） is bi-functional with both phosphotransferase activity and DNase activity and plays an important role in tumor migration and regulation.The breakage of any single disulfide bond of NDPK-A will not change its phosphotransferase or DNase activities.We created a NDPK-A C4/109/145S mutant by site-directed mutagenesis,sequencing confirmed,and

关 键 词：核苷二磷酸激酶A 定点突变 磷酸转移酶活性 DNA酶活性 细胞周期 

分 类 号：R394-33[医药卫生—医学遗传学] R394.3[医药卫生—基础医学]