重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达  

作　　者：李文秀[1] 周凤云[1] 毛伟平[1] 潘杨滨[1] 何志娟[1] 徐翀[1] 刘宣宣[1] 

机构地区：[1]南京师范大学生命科学学院/江苏省分子医学重点实验室,江苏南京210046

出　　处：《江苏农业科学》2011年第2期45-47,共3页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：江苏省教育厅自然科学基金(编号:08KJD350002)

摘　　要：构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达。根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外区同源二聚体插入到原核表达载体PET-28a中,并对重组质粒进行鉴定。转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果获得ICOS胞外区同源二聚体基因大小为757 bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为31 ku。这说明成功地构建人重组ICOS胞外区同源二聚体的原核表达载体,并实现在大肠杆菌中大量表达。为下一步蛋白纯化及制备抗ICOS单克隆抗体奠定了基础。

关 键 词：ICOS JURKAT细胞 pET-28a质粒 重叠延伸PCR 原核表达 

分 类 号：Q785[生物学—分子生物学]