重叠延伸PCR

作品数：201被引量：519H指数：9
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重叠延伸PCR生成长重复DNA序列及其在纳米孔测序中的应用
《中国海洋大学学报（自然科学版）》2024年第9期157-164,共8页宋子婷 程冰晓 胡坤灵 安然 梁兴国 
国家自然科学基金项目(32102064);国家重点研究发展计划项目(2019YFD0901701)资助。
短链DNA的纳米孔测序存在孔道利用率低、数据质量差等问题。因此,亟需建立一种用纳米孔测序技术准确测定短链DNA序列的方法。本研究以1 nmol/L完全互补的序列为引物,以短链DNA为模板,在72℃退火温度下进行PCR,实现了短链DNA的重叠延伸,...
关键词：短链DNA 重复序列 纳米孔测序 重叠延伸 高精度 
绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：3
《中国畜牧兽医》2024年第2期689-699,共11页王永飞 邓博文 刘晓艳 哈尔勒哈·阿曼太 郭嘉栋 周正国 蔡江 李有文 
新疆生产建设兵团区域创新基金项目(2021BB014);塔里木大学校长基金项目(TDZKCX202305)。
[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu...
关键词：绵羊肺炎支原体 重叠延伸PCR EF-Tu基因 多克隆抗体 
SIRT2去乙酰化酶活性位点突变体的构建及活性鉴定被引量：1
《生物技术》2023年第2期135-142,共8页朱蕊 武幸濡 邸杰 许雅淇 谭克 樊玉梅 
河北省自然科学基金项目(C2020205003);河北省大学生创新创业训练计划一般项目(S202110094022)。
[目的]构建人沉默信息调节因子2(silent information regulator 2,SIRT2)的去乙酰化酶活性位点突变体,并验证其去乙酰化酶活性。[方法]设计合成人SIRT2的酶活性关键位点(Q167、N168和H187)突变基因PCR引物。利用重叠延伸PCR技术,获得hSI...
关键词：SIRT2 去乙酰化酶活性 重叠延伸PCR 分子克隆 
基于平行模板的重叠延伸PCR优化策略
《生物医学》2023年第1期62-72,共11页李国庆 刘君怡 罗雪儿 陈明 王程君 陈华波 
基于平行模板的一步法重叠延伸PCR是传统基因定点突变的简化方案,其瑕疵是不完全延伸片段交叉互补会产生野生型干扰。为寻找原方案下形成交叉互补的关键因素,提高其定点突变效率,对诸多相关因素进行了分析。发现调整中介引物浓度稀释比...
关键词：定点突变 平行模板 一步法重叠延伸PCR 两步法重叠延伸PCR 
例谈基于PCR的基因定点突变技术
《中学生物学》2023年第2期4-7,共4页朱栋栋 
近年来,各地多次考查重叠延伸PCR、大引物PCR等新型PCR技术,但不少一线教师对其理解不够透彻。除此之外,重组PCR、环状质粒PCR等也能对基因进行定点诱变,其原理不完全相同,使用情境也各有侧重。本文以基因定点突变技术为线索,将相关的几...
关键词：一线教师 教学素材 拓展视野 定点诱变 重叠延伸PCR 使用情境 PCR技术 
干扰素调节因子3引导RNA真核表达载体的构建
《中华临床实验室管理电子杂志》2022年第4期215-221,共7页鞠思雨 侯卓岩 王晰 姜生远 李佳起 吕海菲 刘文 张之勇 
山东省医药卫生科技发展计划项目(202002050626);国家自然科学基金青年科学基金(82100142);2021年度国家级大学生创新创业训练计划项目(202110439059)。
目的通过构建干扰素调节因子3(IRF3)gRNA真核表达载体,研究IRF3介导的转录非依赖性细胞凋亡的分子机制。方法通过分析IRF3的分子结构,在CHOPCHOP网站设计IRF3分子gRNA的序列,并在pLenti-U6-gRNA-PGK-Neo表达载体上ClaI和NheI限制性内切...
关键词：干扰素调节因子3 重叠延伸PCR CRISPR-Cas9 引导RNA 
重叠延伸PCR技术定点突变TFEB原核表达载体的构建及体外诱导表达和纯化被引量：2
《吉林大学学报（医学版）》2022年第5期1109-1115,共7页焦凤娟 刘俊杰 卢思维 姜东君 
国家自然科学基金青年基金项目(82101340)。
目的:基于重叠延伸PCR(SOE PCR)技术构建转录因子EB(TFEB)丝氨酸114位点突变体原核表达质粒,并进行体外诱导表达和纯化。方法:根据SOE PCR技术原理设计突变引物,以pGEX-6p-1-TFEB质粒为模板,分别采用外侧引物F和R及突变引物F_(n)和R_(n...
关键词：转录因子EB 重叠延伸PCR 定点突变 融合蛋白 丝氨酸 丙氨酸 
5种常用PCR技术简介被引量：2
《生物学通报》2022年第6期46-50,共5页刘璨 姚亭秀 
全国教育科学“十三五”规划2016年度教育部青年课题“用学术研究成果提升高中生生物科学探究能力的实践研究”(EHA160475)。
PCR技术是现代分子生物学研究中最常用的技术,自1986年发明至今,在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多新PCR技术,本文对5种常用PCR技术进行简介.
关键词：重叠延伸PCR 等位基因特异PCR 热不对称性PCR 荧光定量PCR技术 锅柄式PCR 
多片段拼接法克隆人表皮生长因子受体2基因
《生物医学》2022年第1期1-8,共8页陈婉煜 刘君怡 李国庆 刘媛媛 陈华波 
鉴于从cDNA库中克隆长基因较困难的现实,采取分步扩增与DNA组装相结合的方式,提出一种长基因克隆解决方案。以克隆人表皮生长因子受体2基因为例,先分别扩增出该基因的三个片段F1、F2和F3。通过重叠延伸PCR融合前两个片段得到F12,再利用...
关键词：基因克隆 重叠延伸PCR 双片段连接法 人表皮生长因子受体2基因 
多片段扩增结合Gibson组装法克隆基因定点突变被引量：2
《生物工程学报》2022年第3期1218-1226,共9页程盈盈 李国庆 刘君怡 陈婉煜 陈华波 
襄阳市医疗卫生领域科技计划项目(2020YL37)。
为寻找一种简洁高效的基因定点突变方案,利用Gibson组装技术对重叠延伸PCR法进行简化,并以克隆细胞周期蛋白依赖性激酶4基因单位点与双位点突变为例进行验证。采用与重叠延伸PCR相似的策略扩增含点突变的基因片段,同时采用双酶切制备线...
关键词：定点突变 重叠延伸PCR 滚环扩增 Gibson组装 细胞周期蛋白依赖性激酶4 
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