RNA干扰p21对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响  

RNA interference-mediated knockdown of p21 promotes cell proliferation in human hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721

作　　者：谭晓虹[1] 徐恒[2] 韦长元[3] 曹骥[4] 崔凌飞[5] 刘斐[6] 

机构地区：[1]广西医科大学附属肿瘤医院化疗三科,广西壮族自治区南宁市530021 [2]广西医科大学医学科学实验中心,广西壮族自治区南宁市530021 [3]广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科,广西壮族自治区南宁市530021 [4]广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部,广西壮族自治区南宁市530021 [5]广西壮族自治区南溪山医院,广西壮族自治区桂林市541002 [6]广西壮族自治区人民医院医学实验中心,广西壮族自治区南宁市530021

出　　处：《世界华人消化杂志》2011年第8期827-831,共5页World Chinese Journal of Digestology

基　　金：国家自然科学基金资助项目;No.30672363;No.30950028;广西研究生教育创新计划基金资助项目;No.2008105981002D34~~

摘　　要：目的:探讨RNA干扰技术沉默p21基因对肝癌细胞SMMC-7721增殖及恶性表型变化的影响.方法:通过慢病毒载体将p21小干扰RNA片段稳定转染入SMMC-7721细胞,通过RT-PCR、Westernblot分别检测p21mRNA和蛋白表达变化,流式细胞仪检测7721-p21RNAi组(感染p21siRNA慢病毒载体组)、7721-NC组(感染阴性对照慢病毒载体组)、7721组(未转染组)细胞生长周期,MTT法检测转染后SMMC-7721细胞生长情况,细胞克隆形成实验检测单细胞锚定依赖性成克隆能力.结果:慢病毒载体可有效介导p21小干扰RNA片段进入SMMC-7721细胞,经RT-PCR及West-ernblot检测,p21小干扰RNA可以明显降低SMMC-7721细胞p21mRNA和蛋白的表达.流式细胞仪检测细胞周期发现,各组G0/G1期比例分别为32.82%±3.27%、61.25%±0.76%、57.77%±4.08%,S期比例分别为42.56%±5.62%,22.91%±1.53%,25.13%±5.11%.经统计学分析,7721-p21RNAi组G0/G1期比例较其余两组下降(P<0.05),S期比例较其余两组升高(P<0.05),而7721-NC组与7721组相比差异无显著性.MTT法检测细胞生长速度发现,与7721-NC和7721组细胞相比,7721-p21RNAi组细胞的生长速度较快,每天的活细胞数目均多于另外两种细胞系(P<0.05).细胞克隆形成实验发现7721-p21RNAi组、7721-NC组及7721组克隆形成数分别为81.24±1.5、51.67±2.08、52.73±1.53个.7721-p21RNAi组克隆形成数明显多于7721-NC组、7721组(P<0.05),7721-NC组克隆形成数与7721组无明显差异.表明p21表达下降可加速SMMC-7721细胞从G1期进入S期,细胞生长速度加快,单细胞锚定依赖性成克隆能力增强.结论:本研究通过RNA干扰技术反向验证了p21具有抑制肝癌细胞生长及细胞周期进程的作用,为下一步深入研究p21抑制细胞增殖的机制及在肝癌发生发展中所起的作用打下了基础.AIM： To investigate the effect of RNA interference （RNAi）-mediated knockdown of p21 on cell proliferation in human hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721.METHODS： p21 knockdown was achieved in SMMC-7721 cells by lentivirus-mediated tranfection of small interfering RNA （siRNA） targeting the p21 gene.The expression of p21 mRNA and protein was detected by RT-PCR and Western blot,respectively.Cell cycle of 7721-p21 RNAi group （those transfected with p21 siRNA）,7721-NC group （those transfected with empty vecter） and 7721 group （those non-transfected） was determined by ow cytometry （FCM）.Cell proliferation was measured by MTT assay and colony formation assay.RESULTS： The expression of p21 mRNA and protein was obviously reduced in cells transfected with siRNA targeting the p21 gene.The percentage of cells in G0/G1 phase was signif icantly lower in 7721-p21 RNAi group than in 7721-NC group and 7721 group （32.82% ± 3.27% vs 61.25% ± 0.76%,57.77% ± 4.08%,both P 〈0.05）.The growth of cells in 7721-p21 RNAi group was faster than that in 7721-NC group and 7721 group.The number of cell colonies formed in 7721-p21 RNAi group was signif icantly higher than those in 7721-NC group and 7721 group （81.24 ± 1.5 vs 51.67 ± 2.08,52.73 ± 1.53,both P〈 0.05）.CONCLUSION： p21 can inhibit the proliferation of SMMC-7721 cells.

关 键 词：RNA干扰 P21基因 肝细胞癌 细胞周期 

分 类 号：R735.7[医药卫生—肿瘤]