GRIM-19原核表达载体的构建及GST-GRIM-19的诱导表达与纯化  

作　　者：朱靖[1] 周颖[1] 王青元[1] 冯定庆[1] 朱园园[1] 李彩荣[1] 凌斌[1] 

机构地区：[1]安徽医科大学附属省立医院妇产科分子实验室,合肥230001

出　　处：《安徽医科大学学报》2011年第5期493-496,共4页Acta Universitatis Medicinalis Anhui

基　　金：国家自然科学基金(编号:81001168;81072127);安徽省自然科学基金(编号:090413117);安徽省高等学校省级自然科学研究项目(编号:KJ2010B375)

摘　　要：目的构建GRIM-19原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化GST-GRIM-19融合蛋白。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19基因片段,将其克隆至pGEX-4T-3原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达GST-GRIM-19融合蛋白,用Glu-tathione Sepharose 4B纯化,纯化后蛋白经Western blot鉴定。结果构建pGEX-4T-3-GRIM-19原核表达载体成功,表达的GST-GRIM-19融合蛋白相对分子质量约45 ku,浓度0.1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导2 h,并成功纯化到融合蛋白。结论成功构建GRIM-19原核表达载体,诱导表达并纯化GST-GRIM-19融合蛋白。

关 键 词：遗传载体 原核细胞 重组融合蛋白质类 

分 类 号：R394.3[医药卫生—医学遗传学] R341[医药卫生—基础医学]