T4溶菌酶在多型汉逊酵母中的表达及抑菌活性测定  

Expression,characterization,and antimicrobial ability of T4 lysozyme from methylotrophic yeast Hansenula polymorpha A16

作　　者：王楠[1] 王跃驹 李刚强[1] 孙宁[1] 刘德虎[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院生物技术研究所,北京100081 [2]Department of Natural Sciences,Northeastern State University

出　　处：《中国科学：生命科学》2011年第4期313-319,共7页Scientia Sinica(Vitae)

基　　金：国家高技术研究发展计划(批准号:2007AA02Z111);国家科技支撑计划(批准号:2006BAD31B01-04);国家转基因生物新品种培育重大专项(批准号:2008ZX08005-004和2009ZX08005-004B);中国农业科学院生物技术研究所中央级公益性科研院所基本科研业务专项基金资助

摘　　要：溶菌酶是一类对多种细菌都具有明显杀菌效果的蛋白质.本研究将T4溶菌酶基因构建到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,以汉逊酵母A16来源的rDNA序列作为同源重组序列,在毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(pGAP)的调控下,使T4溶菌酶在汉逊酵母A16中以组成型方式稳定高效表达.在37℃,pH6.0,摇瓶发酵培养72h后,表达量达到0.49g/L.结果表明,汉逊酵母能够识别源自毕赤酵母的甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子和醇氧化酶终止子序列,而且rDNA作为同源重组序列可以产生多拷贝的汉逊酵母重组子.对重组蛋白进行了N端测序、质谱及SDS-PAGE检测,发现重组蛋白N端与T4溶菌酶N端氨基酸序列一致,分子量大小约为18.7kD,与预计分子量大小相符.重组T4溶菌酶对革兰氏阳性和阴性细菌都具有抑菌活性和溶壁活性.非变性SDS-PAGE(无DTT)检测发现,重组T4溶菌酶形成了分子内二硫键和少量分子间二硫键,这种不正确的二硫键可能导致重组T4溶菌酶损失部分抗菌活性.

关 键 词：T4溶菌酶 抗菌活性 汉逊酵母 pGAP RDNA 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]