利用IE基因表达外源抗原的HSVⅠ重组病毒的构建  

Construction of Recombinant Virus HSVⅠ by Immediate Early Gene Expression

作　　者：崔伟[1] 刘龙丁[1] 张莹[1] 王蕾[1] 廖芸[1] 王晶晶[1] 郭磊[1] 赵红玲[1] 王丽春[1] 董承红[1] 李琦涵[1] 

机构地区：[1]中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所,昆明市650118

出　　处：《医学分子生物学杂志》2011年第3期215-219,共5页Journal of Medical Molecular Biology

摘　　要：目的 研究ICP22蛋白缺失是否影响病毒的感染复制以及ICP22蛋白在病毒水平上功能.方法 利用同源重组方法用绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的编码基因取代ICP22蛋白的编码基因,以流式细胞仪分选结合蚀斑筛选的方法得到ICP22蛋白缺失的单克隆重组病毒.结果 对ICP22蛋白缺失重组病毒进行绿色荧光的表达情况的镜下观察、GFP基因序列的测定、重组病毒中GFP基因的定量PCR检测、GFP蛋白表达的Western 印迹 检测等方法进行了验证,成功构建了ICP22蛋白缺失的重组病毒,并在研究过程中发现ICP22蛋白缺失的重组病毒出现感染复制停滞的现象.结论 ICP22蛋白缺失的重组病毒出现感染复制停滞的现象提示其在细胞中具有重要的功能.Objective To study whether deletion of ICP22 protein has influence on virus replication and function of ICP22 protein. Methods ICPP22 protein coding gene was replaced with green fluorescent protein （GFP） encoding gene via homologous recombination. The monoclonal re- combinant virus with ICP22 deletion was screened by flow cytometry and plaques screening meth- od. Results GFP expression in recombinant virus was confirmed by quantitative PCR and western blot, suggesting successful construction of the ICP22 deletion recombinant virus. Conclusion Deletion of ICP22 in recombinant viruses led to replication stagnant, suggesting the crucial role for ICP22 in cellular infection.

关 键 词：单纯疱疹病毒 ICP22 同源重组 

分 类 号：Q74[生物学—分子生物学]