Ⅰ型鸭肝炎病毒RNA聚合酶基因的克隆及原核表达  

MOLECULAR CLONING AND PROKARYOTIC EXPRESSION OF RDRP GENE OF DUCK HEPATITIS VIRUS TYPE Ⅰ

作　　者：王超[1,2] 付玉志[1,3] 张伟伟[1,4] 陈宗艳[1] 李传峰[1] 杨宗伟[1,2] 吴润[2] 刘光清[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241 [2]甘肃农业大学动物医学院,兰州730070 [3]湖南农业大学动物科技学院,长沙410128 [4]浙江师范大学化学与生命科学学院,金华321004

出　　处：《中国动物传染病学报》2011年第2期20-25,共6页Chinese Journal of Animal Infectious Diseases

基　　金：公益性农业科研专项(201003012);"863"计划(2011AA10A200);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2010JB18)

摘　　要：根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运用DNAStar软件对ZJ-Ⅴ株病毒与GenBank上已发表的其他不同DHV毒株的RdRp基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,结果表明,ZJ-Ⅴ株与A型DHV-ⅠR85952株（DQ226541）的同源性为97.1%,亲缘关系最近,与2株台湾新型（B型）DHV之间为76.9%和77.0%,与C-GY株和4株韩国新型（C型）DHV株之间为76.2%~76.5%,亲缘关系较远。将RdRp基因克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,获得重组表达质粒pET-RdRp,转化宿主菌E.coli BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示RdRp蛋白分子量约为65 kDa,Western blot检测证明RdRp蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的免疫学活性。本文为进一步研究DHV-Ⅰ的复制机理奠定了基础。In this study,a pair of specific primer,according to the complete genomic sequence of duck hepatitis virus Ⅰ（DHV-Ⅰ） ZJ-Ⅴ strain,was designed to amplify RNA-dependent RNA polymerase gene（RdRp）.Then the sequence of RdRp was compared with some reference sequences of DHV-I published in GenBank,and the results showed that ZJ-Ⅴ strain had closer genetic relationship with DHV-Ⅰgenotype A,compared with genotype B and C.To express RdRp in E.coli,RdRp gene was inserted into pET-32a（＋） vector.And the recombinant plasmid pET-RdRp was transfected into BL21（DE3）cells.The expression product was analyzed with SDS-PAGE and Western blot.The results showed that RdRp was expressed successfully,about 65 kDa.The paper laid the foundation for further study on the replication mechanism of DHV-Ⅰ.

关 键 词：Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ) RNA聚合酶基因(RdRp) 原核表达 序列分析 

分 类 号：S858.322.659.6[农业科学—临床兽医学]