牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的慢病毒载体的构建及鉴定  

作　　者：张晓宇[1] 秦宜德[1] 张文晓[1] 郑欣[1] 何晓光[1] 王巍[1] 

机构地区：[1]安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室,合肥230032

出　　处：《安徽医科大学学报》2011年第7期709-712,共4页Acta Universitatis Medicinalis Anhui

基　　金：国家自然科学基金(编号:30872992)

摘　　要：目的构建并鉴定牛乳铁蛋白肽基因LfcinB基因的慢病毒载体,为LfcinB应用于基因治疗奠定了基础,以便进一步研究LfcinB的功能。方法根据GenBank报道的Lf-cinB基因序列,合成LfcinB基因,PCR方法扩增LfcinB基因,与经EcoR 1和Nhe 1酶切后的pljm1载体[含CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接、转化,产生pljm1-LfcinB慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pljm1-Lf-cinB载体、△8.91载体、pvsvg载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞中绿色荧光蛋白GFP的表达水平测定病毒滴度。Western blot检测Lf-cinB的表达。结果 PCR和测序证实成功构建了pljm1-Lf-cinB慢病毒载体。浓缩病毒悬液滴度为2×108 TU/ML。Western blot检测到目的肽成功表达。结论成功构建含LfcinB的慢病毒载体,为进一步感染细胞和基因治疗奠定了基础。

关 键 词：乳铁蛋白 细胞凋亡 

分 类 号：R341[医药卫生—基础医学] R394.2