荧光定量PCR法检测小鼠肠道中产气荚膜梭菌的实验研究  

作　　者：徐少珊[1] 孙朝晖[2] 陈荣誉[1] 杨永泉[2] 唐玲玲[2] 石玉玲[2] 

机构地区：[1]南方医科大学研究生学院,广州510515 [2]广州军区广州总医院检验科,广州510010

出　　处：《广东医学》2011年第13期1657-1660,共4页Guangdong Medical Journal

基　　金：全军科学技术"十一五"计划专项基金项目(编号:08Z009)

摘　　要：目的建立一系列浓度梯度的A型产气荚膜梭菌(clostridium perfringens,C.perfringens)感染小鼠肠道的动物模型,探讨实时荧光定量PCR法对肠道中C.perfringens的检测。方法小鼠随机分成6组,每组10只,依次腹腔注射浓度为5.7×1095、.7×1085、.7×1075、.7×106和5.7×105 cfu/mL的A型C.perfringens菌液1 mL,空白对照组腹腔注射生理盐水1 mL。连续观察72 h,统计小鼠死亡数量、存活时间及腹腔取样做细菌革兰染色涂片镜检、细菌厌氧血平板厌氧培养、测序鉴定和荧光定量PCR定量检测。结果细菌镜检结果为5.7×109、5.7×108和5.7×107 cfu/mL浓度组在显微镜下能观察到两头钝圆棒状的革兰阳性杆菌,细菌厌氧培养能培养出大量边缘粗糙的菌落;在5.7×1065、.7×105 cfu/mL浓度组和空白对照组不能发现革兰阳性杆菌,利用细菌培养法,5.7×106 cfu/mL组平均能培养出7个菌落,在5.7×105 cfu/mL组和空白对照组不能培养出任何菌落,克隆目的片段测序结果与GeneBank中C.perfringens16S rRNA[AB566417]完全一致。荧光定量PCR法在各浓度组为阳性,空白对照组为阴性。结论荧光定量PCR法在检测C.perfringens具有灵敏度高、特异性好、检验时间短的优点。

关 键 词：A型产气荚膜梭菌 荧光定量PCR法 肠道坏疽 

分 类 号：R446[医药卫生—诊断学]