氧化应激和植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1在氧化低密度脂蛋白上调内皮细胞自噬水平中的作用  

Autophagy of human vascular endothelial cells by oxidized low-density fipoprotein： involvement of oxidative stress but no oxidized low density lipoprotein-1

作　　者：韩侨[1] 张艳林[1] 尤寿江[1] 刘慧慧[1] 曹勇军[1] 陈锐[2] 刘春风[2] 

机构地区：[1]215004苏州大学附属第二医院神经内科 [2]苏州大学神经科学研究所

出　　处：《中华医学杂志》2011年第31期2216-2220,共5页National Medical Journal of China

基　　金：江苏省普通高校研究生科研创新计划（CX09B_036Z）

摘　　要：目的探讨氧化应激和植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1（LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）上调人脐静脉内皮细胞（HUVEC）自噬水平中的作用。方法用LOX-1mAb及抗氧化剂维生素C（vitC）、vitE预处理ox-LDL作用的HUVEC；酶联免疫技术观察培养上清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化物（SOD）含量；免疫印迹技术检测自噬标记物LC3-Ⅱ／LC3-Ⅰ、beclinl及溶酶体膜蛋白2a（Lamp2a）蛋白含量。结果ox—LDL作用在0．5h和6h能显著减少细胞培养上清中T—SOD活力[0．5h（32．73±1．09比40．16±1．28）U／ml；6h（29．32±1．56比40．16±1．28）U／ml，均P〈0．01]；增加其MDA含量[0．5h（1．11±0．04比0．57±0．05）nmol／ml，P〈0．0l；6h（0．69±0．03比0．57±0．05）nmol／ml，P〈0．05]，与上调自噬水平的高峰时间点相吻合，该作用能部分性被抗氧化剂vitC、vitE拈抗。ox-LDL诱导的LC3-Ⅱ／LC3．I表达上调能被vitC、vitE（0．5h，vitC：3．11±0．02比4．31±0．50；vitE：3．464±0．19比4．31±0．50，均P〈0．05；6h，vitC：1．44±0．05比2．31±0．16，P〈0．05）而非LOX-1 mAb抑制；LOX-1mAb能抑制OX-LDL诱导的Lamp2a表达上调（0．5h，0．75±0．02比1．12±0．02，P〈0．01；6h，0．88±0．02比1．06±0．04，P〈0．05），而vitC和vitE仅能抑制Lamp2a6h的表达上调（vitC，0．73±0．01比1．06±0．04，P〈0．01；vitE，0．84±0．02比1．06±0．04，P〈0．05）。结论100μg／ml 0x-LDL上调HUVEC的自噬水平作用不依赖LOX-1受体途径，而是与氧化应激有关。自噬溶酶体形成的增加可能与LOX-1受体介导的ox-LDL入胞有关，氧化应激仅参与了晚期入胞后ox-LDL对自噬溶酶体形成增加的调节。Objective Our previous studies found that 100 μg/ml oxidized low-density lipoprotein （ox-LDL） could up-regulate the autophagic level in human umbilical vein endothelial cells （HUVEC）. The present study was conducted to observe the roles of oxidative stress and lectin-like oxidized low density lipoprotein-1 （ LOX-1 ） in the ox-LDL-induced up-regulation of autophagy. Methods Prior to the ox-LDL exposure, LOX-ImAb, vitamin C and vitamin E were used to study the roles of LOX-1 and oxidative stress in the activation of autophagy. The contents of total-superoxide dismutase （T-SOD） and MDA （malondialdehyde） in the culture medium were detected with enzyme linked immunosorbent assay. Western blot was employed to detect the levels of autophagic marker microtubule-associated protein light chain 3 （ MAP1 -LC3） - Ⅱ/LC3- Ⅰ , beclinl and lysosome associated membrane protein 2a （lamp2a）. Results After the ox-LDL exposure, the down-regulated level of T-SOD [0. 5 h（32. 73 ± 1.09 vs 40. 16 ± 1.28） U/ml,P 〈 0. 01 ; 6 h （29. 32 ±1.56 vs 40. 16 ±1.28 ） U/ml, P 〈 0. 01 ] and the up-regulated level of MDA [0.5 h（1.11 ±0.04 vs 0.57±0.05） nmol/ml, P〈0.01; 6 h （0.69±0.03 vs 0.57±0.05） nmol/ml, P 〈 0. 05 ] in euhure medium were also significant at 0. 5 h and 6 h. The ox-LDL-indueed increased ratio of LC3- 11/LC3- I was reversed by the pretreatments of vitamin C and vitamin E （0. 5 h, vitC ： 3.11 ± 0. 02 vs 4. 31 ±0. 50, P〈0. 05; ritE： 3.46 s0. 19 vs 4. 31 s0. 50, P 〈0. 05 ;6 h,vitC： 1.44 s0.05 vs 2. 31 ± 0. 16 ,P 〈0. 05 ）, but not LOX-lmAb. LOX-lmAb decreased the ox-LDL-induced elevated level of lamp2a protein while vitamin C and vitamin E only inhibited the elevation of lamp2a at the timepoint of 6 h, but not 0. 5 h. Conclusion Oxidative stress, rather than LOX-1, plays an important role in the ox-LDL-indueed up- regulation of autophagy in HUVEC. The formation of autolysosomes is associated with the LOX-l-mediated endoeytosis of ox-LDL. Oxidative stress onl

关 键 词：脂蛋白类 LDL 自噬 氧化性应激 植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]