Δ133p53异构体在内质网应激诱导自噬促进细胞凋亡的机制研究  

Endoplasmic reticulum stress stimulates Δ133p53-dependent autophagy to promote cell apoptosis

作　　者：孙华银[1] 任锋 刘凯 江瑛[3] 石英[4] 李莉 刘秀红[4] 娄金丽 段钟平[5] 陈德喜 

机构地区：[1]首都医科大学附属北京佑安医院医疗保险办公室,100069 [2]北京市肝病研究所 [3]首都医科大学病理生理教研室 [4]首都医科大学附属北京佑安医院艾滋病实验室 [5]首都医科大学附属北京佑安医院人工肝中心

出　　处：《北京医学》2011年第12期953-955,F0003,共4页Beijing Medical Journal

基　　金：北京市优秀人才培养资助项目(2011D003034000022);首都医科大学基础和临床合作项目(2011JL61);北京市丰台区卫生系统科学研究项目(2011)

摘　　要：目的研究p53异构体Δ133p53在内质网应激诱导细胞凋亡过程中的作用,探讨其对自噬的调节。方法应用p53缺失型1299细胞和Δ133p531299细胞为模型,利用Tunicamycin(20μg/ml)诱导的内质网应激导致细胞凋亡;采用免疫荧光方法分别进行凋亡蛋白M30检测以及采用活细胞染料acetoxymethyl(AM)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)对活细胞/死细胞检测以评价细胞凋亡。转染GFP-LC3质粒并通过自噬体点状结构计数以及Real-timePCR方法检测自噬相关基因的表达检测细胞自噬体的形成。结果在内质网应激条件下,Δ133p531299细胞比1299(p53-/-)对细胞凋亡的诱导更加敏感。与1299(p53-/-)细胞相比,在Tunicamycin诱导下,在Δ133p531299细胞中,凋亡蛋白M30高表达并且死细胞数量明显增多。在对自噬的调节方面,在内质网应激条件下,Δ133p53显著提高细胞自噬的形成。与1299(p53-/-)细胞相比,Δ133p531299细胞中自噬体点状结构计数增加较多,并且自噬相关基因ATG5的表达显著上调。结论在内质网应激诱导细胞凋亡过程中,Δ133p53通过诱导细胞自噬而促进细胞凋亡。Objective To study the role of △133p53, an N-truncated p53 isoform initiated at codon 133, in regulating autophagy in the process of endoplasmic reticulum （ER） stress-induced apoptosis. Methods The response of 1299 cell （p53-/-） and △133p53 1299 cell to chemically-induced ER stress （tunicamycin, 20 μg/ml） was contrasted. Cell death was measured by detecting M30 and acetoxymethyl （AM）/propidium iodide （PI） using immunofluorescence analysis. Cellular autophagic activity was monitored using immunofluorescence by counting GFP-LC3 punctate structure and the expression of autophagy related gene by Real-time PCR. Results △133p53 1299 cells were more susceptible to ER-stressed and starvation-stressed apoptosis compared to 1299 （p53-/-） cells. Upon Tunicamycin, a marked increase in the presence of GFP-LC3 puncta was observed in the presence of △133p53; moreover, the gene expression of ATG5 was significant up-regulated, indicating a clear role for △133p53 in the regulation of autophagy. Conclusion △133p53 is implicated in the ER stress-induced autophagy pathway, and contributes to ER stress-induced apoptosis.

关 键 词：内质网应激 Δ133p53 自噬 细胞凋亡 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]