流动相的pH值和离子强度对牛血清蛋白高效液相色谱手性柱分离性能的影响  

Effect of Ionic-Strength and pH Value in Mobile Phase on Enantio-Separation of BSA High Performance Liquid Chromatography Column

作　　者：熊雅进[1] 苏文翠[1] 章伟光[1] 范军[1] 郑盛润[1] 林纯[1] 

机构地区：[1]华南师范大学化学与环境学院/特种材料研究所,广州510006

出　　处：《分析化学》2012年第1期89-94,共6页Chinese Journal of Analytical Chemistry

基　　金：2010科技部科技型中小企业技术创新基金(No.10C26214412704);广东省国际合作-重点引进项目(No.2010B050300021);广东省教育部产学研结合项目(No.2009B090300081)资助

摘　　要：利用羰基咪唑-柱上衍生法制得牛血清蛋白(BSA)生物手性柱,并研究它在高效液相色谱中对3种对映异构体(色氨酸、匹多莫德及4-苯基-1,3-恶唑烷-2-硫酮(L-苯))的手性分离性能。实验结果表明:随着pH值从5.0上升到7.0,由于L-色氨酸与BSA有固定的作用位点,使得其保留值随着pH值的增加而大幅增大。而D-色氨酸与BSA无固定作用位点,其保留值随pH变化基本不变,分离度由1.15上升到8.91,增加了6.8倍;酸性样品匹多莫德与BSA主要是静电作用,与色氨酸相反,其对映体的保留值随着pH的增加逐渐减小,分离度逐渐下降,pH 7.0时为单峰,pH 5.0时Rs=1.27;中性样品L-苯的分离度随着pH值的增加有小幅增大。随着离子强度的减小,3对对映体的保留都增强,分离度增大,增加的幅度依次为色氨酸>匹多莫德>L-苯。BSA chiral columns were prepared based on column modification method with carbonyl imidazole as cross-linker.Enantioseparation of tryptophan,pidotimod and 4-phenyl-1,3-oxazolidine-2-thione（L-ben） was obtained on the BSA chiral column by HPLC.The effects of pH values and ionic strength of mobile phase on enantioseparation performance were investigated.For L-tryptophan,the retention factor（k′） increased significantly as the pH value increased from 5.0 to 7.0.While for D-tryptophan k′ rarely changed and the resolution factor（Rs） increased from1.15 to 8.91.In contrast,the retention factor（k′） for RS-and SR-pidotimod decreased as the pH value increased from 5.0 to 7.0.For L-ben,k′ was only a slight increase when the pH value increased.The retention factors of three enantiomers fluctuated as ionic strength increased.However,Rs decreased when a buffer concentration increased.

关 键 词：牛血清蛋白(BSA) 高效液相色谱 手性分离 PH值 离子强度 

分 类 号：Q51[生物学—生物化学]