血小板活化因子对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制  

Effects and mechanisms of platelet-activating factor on the invasiveness of ovarian cancer cells in vitro

作　　者：姜伟[1] 王宜生[1] 丛青[1] 李明江[2] Bin Ye 徐丛剑[1] 

机构地区：[1]复旦大学附属妇产科医院妇科,上海200011 [2]山东大学附属省立医院妇产科 [3]Department of Obstetrics and Gynecology, Brigham and Women＇s Hospital, Harvard Medical School,USA

出　　处：《中华妇产科杂志》2011年第12期931-935,共5页Chinese Journal of Obstetrics and Gynecology

基　　金：上海市卫生局青年科研项目（2008Y001）

摘　　要：目的探讨血小板活化因子（PAF）对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制，为卵巢癌的治疗提供新的靶点。方法（1）以100nmoL／L的PAF分别处理卵巢浆液性癌细胞株OVCA429细胞及卵巢黏液性癌细胞株RMUG-L细胞，均以仅加入二甲基亚砜（DMSO）为对照，采用体外侵袭实验检测其穿膜细胞数。（2）以不同浓度（分别为0、0．1、1、10、100、1000nmol／L）的PAF处理后检测OVCA429细胞中环腺苷酸应答元件结合蛋白（CREB）、磷酸化CREB（P-CREB）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白的表达水平；以100nmol／L的PAF处理不同时间（分别为0、5min、10min、30min、1h及12h）后检测OVCA429细胞中有丝分裂原活化蛋白激酶p38蛋白（p38MAPK）、磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）、CREB及p-CREB蛋白的表达水平，上述各蛋白的表达水平均采用蛋白印迹法检测。（3）OVCA429细胞在加入PAF（100nmoL／L）的基础上，分别加入各蛋白的抑制剂，即PAF受体（PAFR）抑制剂-wEB2076（50μmol／L）、p-p38MAPK抑制剂-SB203580（10μmol／L）、CREB结合蛋白（CBP）-CREB相互作用抑制剂卅17505（25μmol／L）。实验分为6组：PAF组、PAF’WEB2076组、PAF＋SB203580组、PAF＋217505组、PAF＋SB203580＋217505组及空白对照组，采用蛋白印迹法检测各组细胞中p-p38MAPK、P-CREB、MMP-2蛋白的表达强度。结果（1）体外侵袭实验显示，予PAF处理后，OVCA429细胞的穿膜细胞数[（118±23）个]明显多于其对照细胞[（36±8）个，P〈0．01]，而RMUG-L细胞的穿膜细胞数[（45±13）个]与其对照细胞[（53±9）个]比较无明显变化（P〉0．05）。（2）不同浓度的PAF处理后，OVCA429细胞中p-CREB、MMP-2蛋白的表达水平呈明显的剂量依赖性（P〈0．01），0．1nmol／L的PAF即可引起p-CREB、MMP-2蛋白表达水平日月显升高，至100nmol／L时达高峰；而CREB蛋白的表达无明显变化。100nmol／L的PAF处理不同时间后，OObjective To investigate the effects and possible mechanisms of platelet-activating factor （PAF） on the invasion of ovarian cancer ceils and to provide a potential target for ovarian cancer therapy. Methods （ 1 ） Serous type ovarian cancer cell line OVCA429 with platelet-activating factor receptor （PAFR） positive and mucinous type cell line RMUG-L （PAFR negative） were treated with 100 nmol/L of the PAF, cell invasion ability was determined by transwell cell migration assay. （2） For determination of the optimal PAF concentration, ovarian cancer cell OVCA429 was treated by 0, 0. 1, 1, 10, 100, and 1000 nmol/L of PAF for 10 minutes or 24 hour, respectively. To observe the different time point of protein changes, OVCA429 were treated hy 100 nmol/L of PAF for 0, 5 minutes, 10 minutes, 30 minutes, i hour or 12 hours, respectively. The total proteins of treated cells were extracted according to standard protocol. The expression of p38 mitogen-activated protein kinase （p38 MAPK） , phosphorylated p38 MAPK （p-p38 MAPK）, transcription factor response element-binding protein （CREB） , phosphorylated CREB （p-CREB） and matrix metalloproteinase-2 （MMP-2） were detected by western blot. （ 3 ） To verify the pathway involved in the PAF induction of the cancer eel1 invasion, we repeated the experiments by adding the inhibitors when treating cells with PAF. The inhibitors used were as follows, PAFR inhibitor-WEB2076 （50 μmol/L） , p- p38 MAPK inhibitor-SB203580 （10μmol/L）, CREB binding protein （CBP）-CREB interaction inhibitor- 217505（25 μmol/L）. All treated cells were divided into 6 groups： control group, PAF group, PAF ＋ WEB2076 group, PAF ＋ SB203580 group, PAF ＋ 217505 group and PAF ＋ SB203580 ＋ 217505 group. Results （ 1 ） By transwell assay, 100 nmol/L of PAF could improve the invasion ability of OVCA429 cell significantly [PAF： （ 118 ±23） cells vs. control： （36 8） cells, P 〈0. 01 ], while the same treatment had no effect on RMUG-L eells [P

关 键 词：卵巢肿瘤 肿瘤浸润 血小板活化因子 CAMP反应元件结合蛋白质 基质金属蛋白酶2 

分 类 号：R737.31[医药卫生—肿瘤]