腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制  

Effect of adenosine on EC109 cell apoptosis and its endoplasmic reticulum molecular mechanism

作　　者：韦碧柳[1] 李国平 蒲泽锦[1] 黄官友[2] 冯家琳[3] 叶艳清[1] 吴灵飞[1] 

机构地区：[1]汕头大学医学院第二附属医院消化内科,广东汕头515041 [2]汕头大学医学院第二附属医院妇产科,广东汕头515041 [3]汕头大学医学院第二附属医院信息科,广东汕头515041

出　　处：《中国药理学与毒理学杂志》2011年第6期532-537,共6页Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30972925)~~

摘　　要：目的探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用。方法腺苷2 mmol.L-1作用于EC109细胞24～72 h或腺苷0.5～4 mmol.L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系;免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3,转录因子CHOP和核因子κB(NF-κB)的表达及亚细胞定位;原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测内质网应激相关蛋白表达。结果腺苷对EC109细胞生长具有明显的抑制作用。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用24,36,48和72 h,细胞存活率分别为(57.7±15.0)%,(56.5±11.1)%,(43.8±5.7)%和(28.8±4.1)%,呈时间依赖性下降(r=0.9192,P<0.01);腺苷0.5,1,2和4 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,随药物浓度增加,细胞存活率依次为(83.1±11.2)%,(67.9±6.7)%,(55.3±5.0)%和(45.4±5.4)%,呈浓度依赖性降低(r=0.8252,P<0.01)。腺苷0.5～4mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,细胞凋亡率分别为(15.5±1.1)%,(28.2±0.8)%,(40.1±2.2)%和(50.6±1.3)%,与对照组(2.1±0.3)%相比均明显增加(P<0.05)。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,与正常对照组相比,GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3和CHOP表达明显增强(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3和CHOP发生核易位。GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3、CHOP和NF-κB表达呈浓度依赖性增加(rGRP78=0.9471,r胱天蛋白酶4=0.8977,r胱天蛋白酶3=0.968,rCHOP=0.9762,rNF-κB=0.9471,P<0.05)。结论腺苷可诱导人食管癌EC109细胞凋亡,其分子机制可能与内质网应激凋亡途径的启动有关。OBJECTIVE To investigate the role of endoplasmic reticulum stress（ERS） in adenosine-induced esophageal cancer（EC109） cell apoptosis.METHODS EC109 cells were cultured with adenosine 2 mmol·L-1 for 24-72 h or EC109 cells were cultured with adenosine 0.5-4 mmol·L-1 for 36 h,and cell survival rates were analyzed by MTT.Cell apoptosis was determined by TUNEL assay.The subcellular locations and expressions of ERS-related proteins,such as glucose regulated protein 78（GRP78）,caspase 4,caspase 3,transcription factor CHOP and NF-κB were respectively determined by immunofluorescence test and Western blotting.RESULTSThe survival rates of EC109 cells after EC109 cells cultured with adenosine for 24,36,48 and 72 h gradually decreased to（57.7±15.0）%,（56.5±11.1）%,（43.8±5.7）% and（28.8±4.1）%（r=0.9192,P0.01）.After adenosine 0.5,1,2 and 4 mmol·L-1 incubation with EC109 cells for 36 h,the cell survival rates decreased to（83.1±11.2）%,（67.9±6.7）%,（55.3±5.0）% and（45.4±5.4）% in a concentration-dependent manner（r=0.8252,P0.01） and the apoptotic indexes detected by TUNEL increased to（15.5±1.1）%,（28.2±0.8）%,（40.1±2.2）% and（50.6±1.3）% in concentration-dependent manner（r=0.874,P〈0.05）.Immunofluorescence assay showed CHOP,caspase 3 and caspase 4 translocating to nuclei and Western blotting suggested that expressions of GRP78,caspase 3,caspase 4,CHOP and NF-κB increased in a concentration-dependent manner with adenosine 0.5,1,2 and 4 mmol·L-1 treatment（rGRP78=0.9471,rcaspase 4=0.8977,rcaspase 3=0.968,rCHOP=0.9762,and rNF-κB=0.9471,P〈0.05）.CONCLUSION Adenosine can induce EC109 cells apoptosis,and ERS pathway may be involved in this process.

关 键 词：腺苷 细胞凋亡 内质网 应激 EC109细胞 

分 类 号：R735.1[医药卫生—肿瘤]