非致死性过氧化氢持续性损伤对视网膜色素上皮细胞连接的影响  

Effect of non-lethal H2O2-induced persistent oxidative injury on retinal pigment epithelial barrier

作　　者：张红梅[1] 宫媛媛[1] 吴星伟[1] 施宇华[1] 

机构地区：[1]上海交通大学附属第一人民医院眼科,200080

出　　处：《中华实验眼科杂志》2012年第3期234-238,共5页Chinese Journal Of Experimental Ophthalmology

摘　　要：背景活性氧中间产物可导致细胞氧化损伤，视网膜色素上皮（RPE）细胞对视细胞外节膜盘的吞噬产生了大量的活性氧中间产物过氧化氢（H2O2），易对RPE细胞本身造成反复的氧化损伤。目的探讨非致死性H2O2持续性损伤对RPE细胞连接的影响。方法ARPE-19细胞株以8×10^4个／L的密度接种在96孔板中，在24孔板中细胞爬片的接种密度为4×10^4个／L，并在DMEM／F12培养液中培养，无血清培养液饥饿培养24h后用于实验。将不同浓度（0～0．60mmol／L）的H2O2加入培养液，单溶液细胞增生（MTS）法检测不同浓度H2O2持续性损伤对RPE细胞活力的影响；用Transwell小室法培养细胞，跨上皮细胞电阻（TER）法检测细胞单层的形成时间；以罗丹明-异硫氰酸荧光素标记葡聚糖的量测定H2O2对RPE细胞单层通透性的影响；免疫荧光法检测RPE细胞之间紧密连接蛋白ZO-1的表达情况。结果不同质量浓度H2O2作用组细胞活力（A490值）的差异有统计学意义（F=991．501，P=0．000），0．20—0．60mmol／LH2O2组细胞活力明显低于对照组，差异均有统计学意义（t=3．200、11．368、4．256、2．929、10．818、15．433、64．125、98．805，P〈0．05）。ARPE-19细胞接种于Transwell小室后11d时TER值为（24．9±1．3）Q·cm2，7d时为（17．8±1．4）n·cm2，差异有统计学意义（t=5．228，P=0．014）；至第15天左右达到稳定水平，约为（25．9±0．9）Q·cm2。细胞通透性检测表明，无细胞的空白组葡聚糖渗漏量（相对荧光强度）为433．08±51．53，无H2O2的对照组渗漏量为255．39±16．44，明显低于空白组，差异有统计学意义（t=12．515，P=0．006）；H2O2处理的实验组渗漏量为363．28±26．17，较对照组渗漏增加，差异亦有统计学意义（t=14．412，P=0．005）。免疫荧光检测可见无H2O2，对照组细胞ZO-1连接完整，H2O2组较无H2O2对照组细胞ZO-1连接呈�Background Reactive oxygen intermediate products lead to the oxidative injury of cells. Retinal pigment epithelial（RPE） cells produce lots of reactive oxygen intermediate products during the swallow of out disc, but how this procedure cause the persistent oxidative injury of RPE ceils is poorly understood. Objective The present study was to evaluate the effect of non-lethal H202-induced persistent oxidative injury on RPE barrier in vitro. Methods ARPE-19 cell links were inoculated on 96 well plate at the density of 8 x 104 cells/L and the cell climbing slice of 24 well at the density of 4x 104 cells/L. The cells were cultured in DMEM/F12 medium, and the ceils cultured for 24 hours in free-serum medium were used in the experiment. 0-0.6 mmol/L of H202 were added into the medium. Cellular viability was assessed using 3 - （ 4,5-dimethyhhiazol-2-yl ） -5 - （ 3 -carboxymethoxyphenyl ） -2- （ 4-sulfophenyl ） - 2H-tetrazolium（MTS） assays. Transepithelial electrical resistance （TER） was used to detect cell monolayer forming time after culture in Transwell chamber. The permeability of cell monolayer was examined by rhodamine isothiocyanate-dextran transepithelial flux, and immunofluorescence was used to investigate the distribution of the junction protein zonula occludens （ ZO-1 ）.

关 键 词：过氧化氢 视网膜色素上皮 氧化损伤 紧密连接 

分 类 号：R774.1[医药卫生—眼科]