我国地方品种姜曲海猪TLR5基因的克隆、表达及鉴定  

作　　者：孙小林[1] 潘志明[1] 方强[1] 刘仲义[1] 焦新安[1] 

机构地区：[1]扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏扬州225009

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2012年第4期436-438,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30871860;31172299);江苏省自然科学基金资助项目(BK2010039);江苏省青蓝工程项目联合资助(苏教师200830号)

摘　　要：目的:克隆我国地方品种姜曲海猪TLR5基因,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性,为进一步研制TLR5单克隆抗体(mAb)提供免疫原。方法:从全血中提取姜曲海猪的基因组,设计特异性引物,利用PCR方法扩增得到TLR5基因片段,PCR产物克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达质粒pET-TLR5,将重组表达质粒转化E.coli BL21,0.5 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定蛋白活性。结果:成功扩增出猪TLR5基因片段,大小为2 571 bp。酶切鉴定结果表明,猪的TLR5基因成功克隆入原核表达载体pET30a(+)中,重组质粒pET-TLR5在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出相对分子质量(Mr)大小约95 200;Western blot结果表明,表达产物与兔抗小鼠TLR5 mAb具有良好的反应性。结论:成功克隆并表达具有较好免疫原性的猪TLR5分子,为其mAb的制备提供生物材料。

关 键 词：猪 TLR5 克隆 原核表达 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]