半合成-酶连法克隆EFsec基因及其初步表达分析  

作　　者：李丽[1] 朱贵明[1] 汪坤福[1] 张鹏霞[1] 

机构地区：[1]佳木斯大学,黑龙江佳木斯154007

出　　处：《中国老年学杂志》2012年第9期1868-1870,共3页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：黑龙江省卫生厅项目(2010-482);佳木斯大学重点科研项目(Szj2008-013);佳木斯大学研究生创新项目(YJSCX2011-013JD)

摘　　要：目的将缺失一段编码序列的真核硒代半胱氨酸-tRNA特异性延伸因子(EFsec-)基因补齐,并克隆到真核表达载体进行初步表达分析。方法采用人工合成法合成所缺失的基因片段,然后利用EFsec-基因序列中靠近5'端存在的天然酶切位点进行酶连,再用PCR方法扩增出拼接产物,并将其克隆到pcDNA3.1(-)载体。采用脂质体转染法转染HEK293T细胞后应用RT-PCR法检测EFsec基因的表达。结果准确快捷地将EFsec-基因补齐了其5'端缺失的基因序列,并成功地构建了其表达质粒pcDNA3.1-EFsec,转染哺乳动物细胞后检测到了EFsec基因的显著表达。结论半合成-酶连法可以高效快捷地补齐并克隆缺失的EFsec-基因,提供了一种拼接基因的有效策略和方法,同时也为EFsec基因的下一步研究奠定了基础。

关 键 词：半合成-酶连法 克隆 表达 EFsec 硒蛋白 

分 类 号：R285.5[医药卫生—中药学] Q255[医药卫生—中医学]