抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体的构建及表达  

作　　者：张晓晓[1] 王芳[1] 阎岩[1] 刘梓谕[1] 于澜[1] 李璞媛[1] 张蕾[1] 张芳琳[1] 徐志凯[1] 吴兴安[1] 

机构地区：[1]第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2012年第5期506-509,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金(30801037)

摘　　要：目的:构建抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中获得稳定、高效表达,并对其生物学活性进行初步鉴定。方法:利用基因重组技术将本室前期构建的含有轻、重链嵌合基因的载体PMD18-T-VH和PMD18-T-VL双酶切获得重链、轻链基因后,克隆到前期改构的高效真核表达载体pCI-neo-M中,用脂质体法转染野生型CHO-K1细胞,在G418和氨甲喋呤(MTX)双筛选压力下筛选稳定高效表达细胞株,ELISA方法检测重组蛋白的表达,用Protein A HP Spin Trap纯化目的蛋白后进行SDS-PAGE和Western blot法检测,并通过体外中和实验检测其中和活性。结果:成功构建了抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体,转染CHO-K1细胞后经过3轮亚克隆筛选获得稳定表达抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体的细胞系,表达量约为1 mg/L,SDS-PAGE和Western blot法检测到目的蛋白的表达,微量细胞中和实验检测其中和活性,与亲本单克隆抗体(mAb)的中和活性相近。结论:抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体在CHO-K1细胞中成功表达,并具有良好的中和活性,为该抗体进一步的实验研究和临床应用奠定了基础。

关 键 词：汉坦病毒 人源化改造 二氢叶酸还原酶 真核表达 CHO-K1细胞 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]