钙网织蛋白重组腺病毒载体构建及体外表达  

作　　者：赵丹[1] 刘新莉[1] 马萍[1] 

机构地区：[1]中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所,辽宁沈阳110001

出　　处：《中国老年学杂志》2012年第12期2561-2563,共3页Chinese Journal of Gerontology

摘　　要：目的构建钙网织蛋白(CRT)基因重组腺病毒载体,并检测其在293LP细胞中的表达。方法根据Genbank中提供的CRT基因序列,设计并合成引物,以人乳腺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人CRT基因片段,测序后将CRT基因片段定向克隆至pShuttle-CMV重组穿梭载体,进而将穿梭载体克隆至PacⅠ限制性内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi。结果重组穿梭载体pShuttle-CRT经EcoRI/KpnⅠ酶切鉴定连接成功。酶切穿梭载体将CRT片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-CRT,鉴定证实Ad-CRT载体构建成功。Ad-CRT转染293LP细胞并通过Western印迹法和Real-time PCR法证实其体外表达。结论成功构建CRT重组腺病毒载体Ad-CRT并证实其在293LP细胞中表达。

关 键 词：钙网织蛋白(CRT) 腺病毒载体 基因治疗 

分 类 号：R73[医药卫生—肿瘤]