双特异性抗肿瘤重组腺病毒对前列腺癌细胞的抑制作用  

Inhibition effect on prostate cancer cells by an hTERT-promoter-dependent oncolytic adenovirus that expresses apoptin

作　　者：王金辉[1] 张慕淳[1] 李霄[2] 齐延新[2] 刘广臣[3] 孙丹丹[2] 金宁一[2] 

机构地区：[1]吉林大学中日联谊医院泌尿外科,长春130031 [2]军事医学科学院 [3]吉林大学第一临床医院创伤外科

出　　处：《中华泌尿外科杂志》2012年第7期549-553,共5页Chinese Journal of Urology

基　　金：国家自然科学基金资助项目（81101140）;“重大新药创制”科技重大专项资助项目（2010ZX09401-305-14）

摘　　要：目的探讨结合肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抑癌基因Apoptin的腺病毒Ad—hTERTp—Ela—Apoptin（Ad—VT）对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用。方法于96孔板内制备前列腺癌PC一3单层细胞（5×10^3个／孔），分别用100个感染复数（multiplicityofinfection，MOI）、10MOI和1MOI的重组腺病毒Ad—VT、Ad—CMV—Apoptin（Ad—VP3）、Ad—hTERTp—E1a—EGFP（Ad．GT）和Ad—CMV．EGFP（Ad—EGFP）进行感染，以未感染孔为对照，每个剂量设3个复孔。采用96h噻唑盐（MTT）法，检测重组腺病毒埘PC-3细胞的抑制作用。于6孔板制备PC-3单层细胞（1×10^6个／孔），分别用100MOI的Ad—VT、Ad—VP3、Ad-GT和Ad—EGFP感染PC-3细胞，培养48h后，分别应用AO／EB染色法、DAPI染色法、AnnexinV检测法对PC-3细胞进行染色，在显微镜下观察细胞形态，分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式；应用Caspase榆测法对PC-3细胞提取总蛋白，检测Caspase酶活性，分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式。结果MTT法结果显示除Ad．EGFP外，Ad—VT、Ad—VP3和Ad—GT均不同程度地表现出对PC-3细胞的抑制作用，其中Ad—VT、Ad—GT的抑制作用强于Ad—VP3，差异有统计学意义（P〈0．05）；培养48、72、96h，随着MOI的增高，Ad—VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定剂量效应关系趋势，感染剂量为100MOI时，Ad．VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定时间效应关系趋势。通过AO／EB、DAPI、AnnexinV检测法和Caspase酶活性检测结果显示，Ad—VT可通过诱导PC-3细胞的捌亡抑制PC-3细胞的增殖。其中AO／EB染色可观测到经Ad—VT感染的PC-3细胞呈现橘红色；DAPI染色可观测到经Ad—VT感染的PC-3细胞细胞核呈现亮蓝色，且存在核内物质碎裂；AnnexinV检测法可观测到经Ad—VT感染的PC．3细胞出现磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加等凋亡特征；Caspase检测结果显示Ad—VT可明显上调Caspase2、3、6、8�Objective To investigate the inhibition effects of an hTERT-promoter-dependent oncolytic adenovirus Ad-VT that expresses apoptin on human prostatic carcinoma cell PC-3. Methods MTT assay was used to measure viability of PC-3 cell which was infected by recombinant adenovirus. The viability was measured at time points of 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 and 96 h after infection. AO/EB staining, DAPI staining. Annexin V assav were used to investigate the lethal effect and style of Ad-VT on PC-3 cell in vitro. The Caspases were measured by whole cell extraction of PC-3 cells 48hrs after infection. Results Ad-VT, Ad-VP3 and Ad-GT inhibited the proliferation of PC-3 cell in vitro. Ad-VT and Ad-GT were more effective than Ad-VP3 on cell growth, P 〈 0.05. At 48, 72, 96 h time points, the inhibition effect of Ad-VT on PC-3 cell exhibited a dose related manner. When infection at MOI 100, the inhibition effect of Ad-VT on PC-3 cells exhibited time related manner. The AO/EB staining, DAPI staining, Annexin V assay, Annexin V assays and Caspase assays showed that Ad-VT inhibited the proliferation of PC-3 cells by inducing apopto- sis of prostate cancer cells, Loss of cytoplasmic membrane integrity. Conclusions The hTERT-promoterdependent oncolytic adenovirus Ad-VT could effectively suppress prostate cancer cells PC-3 growth.

关 键 词：前列腺癌 凋亡素 重组腺病毒 凋亡 

分 类 号：R737[医药卫生—肿瘤]