6-羟多巴胺对嗜铬细胞瘤细胞单胺类神经递质及其合成限速酶基因的作用  

Effects of 6-hydroxydopamine and inhibitors for vesicular monoamine transporter on monoamine neurotransmitter and rate-limiting enzyme gene of them in PC12 ceils

作　　者：邢红霞[1] 刘胜[2] 朱元凯[3] 田小军[3] 史莉瑾[3] 王玉梅[3] 张博爱[1] 

机构地区：[1]郑州大学第一附属医院神经内科,450001 [2]新乡医学院第一附属医院普外二科 [3]新乡医学院第一附属医院神经内一科

出　　处：《中华神经科杂志》2012年第8期605-611,共7页Chinese Journal of Neurology

基　　金：国家自然科学基金资助项目（81071091）

摘　　要：目的探讨6-羟多巴胺（6-OHDA）对大鼠嗜铬细胞瘤（PC12）细胞单胺类5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、多巴胺递质及其合成限速酶基因色氨酸羟化酶（TpH）mRNA、多巴胺B羟化酶（DβH）mRNA和酪氨酸羟化酶（TH）mRNA的影响，及囊泡单胺类转运体（VMAT）功能抑制对上述物质的作用。方法分别用不同浓度6-OHDA（25、50、100、200μmol／L），不同浓度的VMAT功能抑制剂利血平（50、100、400、1600nmol／L）与6-OHDA（100μmol／L）作用于PC12细胞，于不同时间点（0、12、24、36、48h）用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活性，酶联免疫（ELISA）法检测细胞内5-HT、NE、多巴胺递质，并用荧光实时定量PCR（RT-PCR）法检测TpHmRNA、DβHmRNA及THmRNA相对表达量。结果（1）加入不同浓度的6-OHDA时，PC12细胞中细胞活性随6-OHDA浓度增加而下降，并随作用时间的延长浓度降低更加明显。而在100μmol／L6-OHDA组中，随着利血平浓度的增加，细胞活性显著下降，差异有统计学意义。PC12细胞中5-HT浓度随6-OHDA浓度增加下降不明显，但在同一浓度组中随作用时间的延长浓度降低明显，尤其在36h时间点浓度最低。NE随6-OHDA浓度增加显著下降，并随作用时间的延长表达量降低更加明显。多巴胺浓度随6-OHDA浓度增加显著降低，但随作用时间的延长浓度变化不明显。100μmol／L6-OHDA组中，随着利血平浓度的增加，5-HT、NE及多巴胺浓度显著下降，差异有统计学意义。（2）与对照组相比，加入不同浓度的6-OHDA时PC12细胞TpHmRNA、DβHmRNA及THmRNA表达随6-OHDA浓度增加显著下降，并随作用时间的延长表达量降低更加明显，而在100μmol／L 6-OHDA组中，随着利血平浓度的增加（50、100、400、1600nmol／L），TpHmRNA（0．006±0．001、0．003±0．000、0．003±0．000、0．002±0．000），DβHmRNA（0．005±0．002、0．003±0．001、0．002±Objective To study the effects of 6-hydroxydopamine （6-OHDA） , and inhibitors for vesicular monoamine transporter （ VMAT ） on 5-hydroxytryptamine （ 5-HT ）, norepinephrine （ NE ） and dopamine （DA） and the expressions of tryptophan hydroxylase （TpH） mRNA, dopamine-beta-hydroxylase （DβH） mRNA and tyrosine hydroxylase （TH） mRNA in PC12 cells. Methods The cell viability was determined using MTT assay, the density of 5-HT, NE and DA was detected using enzyme-linked immunosorbent assay, and the expressions of TpHmRNA, DβHmRNA and THmRNA were detected using RT-PCR in PC12 cells at different time points （0, 12, 24, 36, 48 h） after exposure to different concentrations of 6-OHDA（25, 50, 100, 200 μmol/L） , and VMAT inhibitors, reserpine （50, 100,400, 1600 nmol/L）, which combined with 6-OHDA （100 μmol/L）. Results （1）The cell viability declined with the increasing concentration of 6-OHDA which showed time dependence. The cell viability in PC12 cell which treated with reserpine decreased significantly in the responding group. The density of 5-HT in PC12 cell did not decrease with the increasing concentration of 6-OHDA, but the change had the time dependence, and the density of 5-HT was lowest at 36 h. The density of NE decreased with the increasing concentration of 6-OHDA which showed time dependence. The density of DA in PC12 cell decreased with the increasing concentration of 6-OHDA, but the change did not have the time dependence. The density of 5-HT, NE and DA in PC12 cell which treated with reserpine decreased significantly in the responding group. （2） The expressions of TpHmRNA, DβHmRNA and THmRNA in PC12 cell decreased with the increasing concentration of 6-OHDA which showed time dependence. The expressions of TpHmRNA （0. 006 ± 0. 001, 0. 003 ± 0. 000, 0. 003 ± 0. 000, 0. 002 ± 0. 000） ; DβHmRNA （0. 005 ± 0. 002, 0. 003 ± 0. 001, 0. 002 ± 0. 001, 0. 001 ±0. 000） and THmRNA（0. 005 ±0. 002, 0. 003 ±0. 001,0. 002 ±0. 001, 0. 001 ±0. 000） i

关 键 词：羟多巴胺 PC12细胞 利血平 囊泡单胺转运蛋白质类 多巴胺Β羟化酶 

分 类 号：R736.6[医药卫生—肿瘤]