大豆KTi基因和BBi基因双价RNAi表达载体的构建  

作　　者：付永平[1] 宋冰[1,2] 王丕武[1] 夏海峰[1,3] 高玮[3] 

机构地区：[1]吉林农业大学农学院 [2]吉林市农业科学院 [3]通化市农业科学院

出　　处：《农业机械》2012年第16期74-77,共4页Farm Machinery

基　　金：教育部博士点基金项目(20070193005)

摘　　要：以KTi基因的ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GUS-KTiS为模板,采用PCR技术克隆含有KTi基因的完整ihpRNA构件,并将其克隆到pMD18-T载体,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并进行序列比对;然后以BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS为基础,利用限制性内切酶BstⅪ单酶切,将KTi基因的完整ihpRNA构件连入其中。最后利用冻融法转化根癌农杆菌,并进行PCR鉴定。结果表明:PCR扩增得到含有KTi基因的完整ihpRNA构件,构建成重组克隆载体pMD18-T-KRNAi,并构建成双价ihpRNA种子特异性表达载体pKTi-BBi-RNAi,并转化得到含有pKTi-BBi-RNAi的农杆菌EHA105。成功构建同时具有大豆胰蛋白酶抑制剂KTi基因和BBi基因的双价RNAi种子特异性表达载体,KTi基因和BBi基因的ihpRNA表达框架成功转入农杆菌中。

关 键 词：大豆 胰蛋白酶抑制剂KTi基因 BBi基因 RNAi表达载体 种子特异性启动子 

分 类 号：TS201.2[轻工技术与工程—食品科学]