hsa-miR-203真核表达载体的构建及对K562细胞增殖与凋亡的影响  

作　　者：何金花 黎毓光 谢杏仪 陈顺仪 王莉 邹茂贤 黄国贤 

机构地区：[1]广州市番禺区中心医院检验科,广州511400

出　　处：《临床检验杂志》2012年第8期595-598,共4页Chinese Journal of Clinical Laboratory Science

基　　金：广东省科技厅社会发展项目(2011B080702011)

摘　　要：目的构建hsa-miR-203(人微小非编码RNA-203)的真核表达载体,观察其对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562)增殖和凋亡的作用。方法构建hsa-miR-203靶向基因的真核表达载体PmiR-203,用脂质体转染法将PmiR-203转染K562细胞;可溶性噻唑盐-8(WST-8)法检测转染后的K562细胞增殖的情况,流式细胞术检测转染后K562细胞的早期凋亡率,实时荧光定量RT-PCR检测bcr/abl mRNA的表达水平,比色法测定caspase-3、caspase-9的活性。结果本法成功构建了重组真核表达载体PmiR-203,流式细胞术结果表明,K562细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达率52.6%。PmiR-203转染K562细胞48 h后,能明显抑制K562细胞的增殖,并促进细胞的早期凋亡。实时荧光定量RT-PCR结果表明,不同浓度的PmiR-203能显著下调bcr/ablmRNA的表达水平,转染后K562细胞的caspase-3、caspase-9的活性明显增强。结论成功构建了hsa-miR-203的真核表达载体PmiR-203,后者主要通过下调bcr/abl融合基因的表达抑制K562细胞的增殖,并通过活化caspase-3、caspase-9促进K562细胞的早期凋亡。

关 键 词：微小RNA 人微小非编码RNA-203 真核细胞表达载体 K562细胞 

分 类 号：R733.72[医药卫生—肿瘤]