BHRF1基因与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒载体的构建  

作　　者：张艳平[1] 

机构地区：[1]常德职业技术学院医学系,湖南常德415000

出　　处：《中国老年学杂志》2012年第21期4716-4718,共3页Chinese Journal of Gerontology

摘　　要：目的构建BHRF1基因与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒表达载体及获得稳定表达BHRF1的慢病毒的方法。方法通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法从鼻咽癌组织中扩增获得BHRF1的基因全长CDS序列,并克隆于带GFP荧光报告基因慢病毒表达载体中,酶切验证测序正确后,将质粒pWPXL-hBHRF1-IR ES-GFP与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,将浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞,荧光显微镜观察下293T细胞的绿色荧光表达及转染效率。结果电泳鉴定与目的基因表达条带完全吻合,测序结果显示扩增得到的BHRF1序列与GenBank公布的参考序列完全一致,双酶切和测序结果证明BHRF1已正确地克隆到慢病毒表达载体中,包装后慢病毒颗粒可高效转染293T细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光表达,转染效率>90%。结论成功构建了BHRF1与GFP融合基因慢病毒表达载体,为进一步研究BHRF1基因的相关功能提供了适合的稳定转染载体。

关 键 词：BHRF1基因 慢病毒载体 鼻咽癌 绿色荧光蛋白 

分 类 号：R73[医药卫生—肿瘤]