豇豆胰蛋白酶抑制剂的大量纯化和急性毒性研究  被引量:1

Large-scale purification and acute toxicity of cowpea trypsin inhibitor

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作  者:宫照龙[1] 卓勤[1] 张敏[1] 吴景欢[1] 朴建华[1] 杨晓光[1] 

机构地区:[1]中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室,北京100050

出  处:《卫生研究》2012年第6期889-894,共6页Journal of Hygiene Research

基  金:转基因生物新品种培育科技重大专项资助(No.2011ZX08011-005)

摘  要:目的用大肠杆菌大量表达豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白(CpTI)并检测其急性毒性。方法将重组表达载体pET41-CpTI转化大肠杆菌,用IPTG诱导目的蛋白表达,通过疏水层析和阴离子交换层析等色谱技术纯化大肠杆菌表达的CpTI蛋白。取60只ICR小鼠,随机分成6组,每组10只,雌雄各半,经口灌胃法分别一次性给予10.0、4.64、2.15和1.00g/kg BW的重组CpTI蛋白,并设5.00g/kg的BSA对照蛋白组和水空白对照组,连续观察14d。结果所有的小鼠在观察期间体重、脏器比重、进食量等均未出现显著变化,在15d大体解剖也未发现明显的病理变化。小鼠对CpTI蛋白的最大耐受剂量(MTD)应大于10.0g/kg BW。结论在该试验条件下,经口灌胃法给予ICR小鼠CpTI蛋白,未发现其毒性。Objective To provide the acute toxicity data of cowpea trypsin inhibitor(CpTI) using recombinant protein purified from E.coli.Methods Recombinant CpTI protein was expressed and purified from E.coli.Bacterial recombinant plasmid was transformed into E.coli and the transformed cells were induced with IPTG.The expressed CpTI protein was purified by hydrophobic interaction chromatography and anion exchange chromatography.Sixty mice,randomly assigned to 6 groups,were administrated 10.0,4.64,2.15 and 1.00g/kg BW of CpTI or 5.00g/kg BW of BSA control protein or sterile water respectively by oral gavage.Results All animals survived with no significant change in body weight and food consumption throughout the study.Macroscopic necropsy examination on day 15 revealed no gross pathological lesions in any of the animals.The maximum tolerated dose(MTD) of CpTI was more than 10.0g/kg body weight in mice.Conclusion No toxicity of CpTI protein was found in ICR mice model.

关 键 词:豇豆胰蛋白酶抑制剂 蛋白纯化 急性毒性实验 食品安全性评价 

分 类 号:Q556.9[生物学—生物化学] TS201.6[轻工技术与工程—食品科学]

 

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