大肠杆菌亮氨酰tRNA合成酶巯基的修饰及标记肽的顺序测定  

作　　者：缪枫 施建平[1] 王应睐[1] 

机构地区：[1]中国科学院上海生物化学研究所,上海200031

出　　处：《中国科学（B辑）》1990年第6期606-612,共7页Science in China(Series B)

基　　金：国家自然科学基金

摘　　要：E. coli LeuRS分别被DTNB,NEM,IAA修饰后,丧失氨基酸活化和氨酰化活性,这两种活性基本上平行地下降,DTNB,NEM和IAA的二级反应常数分别为1700,150和0.46mol/L^(-1)min^(-1),化学计量显示LeuRS的一个巯基是活性必需的,底物Leu和Leu-AMP对该巯基的修饰有明显的保护作用,表明这一活性巯基处于LeuRS的氨基酸活化区域,经过[^(14)C]NEM标记LeuRS巯基,胰蛋白酶完全酶解,HPLC分离标记肽段及顺序测定,表明[^(14)C]NEM主要的标记位点是^(179)Cys~*-Asp-Thr-Lys^(182),这一结果提供了氮基酸活化区域位于LeuRS N瑞区的证据。

关 键 词：LeuRS 巯基修饰 标记肽 活性区域 

分 类 号：Q559.2[生物学—生物化学]