小鼠水通道蛋白1基因shRNA慢病毒载体构建与鉴定  

作　　者：章杰[1,2] 江华[1] 张盈帆[1] 方帆[1] 宋艳玲[1] 唐乙[1] 芦立轩[1] 

机构地区：[1]第二军医大学上海长征医院整形外科,上海200003 [2]南昌大学第一附属医院整形美容科,江西南昌330006

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2013年第1期48-50,53,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金(31271264;81100950)

摘　　要：目的应用RNA干扰技术,构建小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因重组慢病毒载体并鉴定。方法对小鼠AQP1 mRNA分析,设计合成的单链引物经退火形成双链寡核苷酸序列,连接入经Age I和EcoR I双酶切线性化的pLKO.1-TRC慢病毒质粒载体中,菌液PCR鉴定并经测序验证。测序正确后与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞,收集病毒上清经高速离心浓缩后感染小鼠小胶质细胞BV-2,Western blot法分析筛选有效shRNA序列。结果成功退火合成3对发夹shRNA序列并将其克隆到pLKO.1-TRC载体中,构建重组质粒pLKO-AQP1-SH1、2、3,经菌液PCR鉴定和测序验证载体构建成功。Real-time PCR检测发现重组质粒pLKO-AQP1-SH2感染BV-2细胞后AQP1 mRNA表达最低,Western blot结果进一步验证结果的准确性。结论成功构建出AQP1基因shRNA慢病毒载体。

关 键 词：RNA干扰 AQP1 慢病毒 脑肿瘤 神经系统损伤 基因治疗 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]