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作 者:秦迎春[1] 刘鹏[1] 杨立荣[1] 徐刚[1] 吴坚平[1]
机构地区:[1]浙江大学化学工程与生物工程学系,杭州310027
出 处:《生物加工过程》2013年第1期65-69,共5页Chinese Journal of Bioprocess Engineering
基 金:国家重点基础研究发展计划(973计划)资助(2011CB710800);国家高技术研究发展计划(863计划)资助(2011AA02A209);国家自然科学基金面上项目资助(21076187)
摘 要:通过易错PCR手段将R-2-氯丙酸脱卤酶定向进化,并使用基于Cl-浓度显色反应的高通量筛选得到有效突变子库,发现突变子DehDIV-G2和DehDIV-E7的酶比活力分别提高25.2%和38.7%。通过SYBYL对酶与底物进行分子对接显示,DehDIV-G2的活化能下降0.961 4 kJ/mol,DehDIV-E7的活化能下降2.549 8 kJ/mol。由于酶和底物R-2-氯丙酸的活化能下降,亲和能力提高,从而提高酶的比活力。By the error-prone PCR and high throughput screening based on the color reaction of chloride ion concentration, a mutant library of R-2-CPA dehalogenase was created and screened. The specific activity of the mutants, called the DehDIV-G2 and DehDIV-E7, increased by 24. 8% and 39.6%, respectively. Molecular docking of the enzymes with substrates was carried out with SYBYL. Docking scoring displayed that DehDIV-G2 decreased the activation energy of 0. 961 4 kJ/mol, and DehDIV-E7 decreased the activation energy of 2. 549 8 kJ/mol. The mutant enzymes decreased the activation energy, and increased the affinity with R-2-CPA,thus the enzyme specific activities increased.
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