卵巢癌细胞中乳源免疫调节肽受体的筛选、鉴定及其功能的初步研究  

作　　者：何晓光[1] 秦宜德[1] 

机构地区：[1]安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室

出　　处：《安徽医科大学学报》2013年第2期137-137,共1页Acta Universitatis Medicinalis Anhui

基　　金：国家自然科学基金(编号:30872992)

摘　　要：目的利用乳源免疫调节肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)进行受体的筛选、鉴定及其功能的初步研究。方法在激光共聚焦显微镜下,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PGPIPN,作用于SK-OV3,观察其细胞定位;培养SKOV3细胞,从中提取PGPIPN的受体或作用位点蛋白;PGPIPN作为亲和层析的配基,通过NHS-activated亲和层析柱进行分离和纯化受体;真空冷冻干燥仪浓缩蛋白;SDS-PAGE初步验证筛选结果;经电喷雾质谱法及生物信息学对条带蛋白进行测序和分析;荧光标记肽与受体的结合试验,验证受体和PGPIPN的结合性;利用MTT法将一定浓度的PGPIPN和不同浓度的受体与卵巢癌细胞共孵育,观察对细胞增殖/凋亡可能产生的影响。结果在激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光标记肽结合于SKOV3的胞膜上;通过提取膜蛋白和亲和层析法成功筛选了特异性结合的受体;通过电喷雾质谱法初步确定性质相似、功能相关蛋白,可能为ATP合酶、basigin等;荧光标记肽与受体的结合试验验证了受体的特异性;MTT结果显示:在不加受体时,PGPIPN能抑制SKOV3增殖,当PG-PIPN、受体与卵巢癌细胞共孵育时,PGPIPN抑制SKOV3增殖明显减弱(P<0.05,P<0.01)。结论PGPIPN能抑制SKOV3的增殖并诱导细胞凋亡的作用位点位于细胞膜上,其抗癌作用可能通过胞膜结合蛋白而启动信号转导通路,为进一步探讨其抗癌机制奠定了基础。

关 键 词：人卵巢癌细胞株 免疫调节肽 受体 筛选 鉴定 激光共聚焦显微镜 电喷雾质谱法 诱导细胞凋亡 

分 类 号：R737.31[医药卫生—肿瘤]