驴皮药材RAPD分析方法建立及其与伪品马皮的鉴别  

Establishment of RAPD for analysis on furs of Equus asinus and discrimination from Equus caballus orientalis

作　　者：田俊生[1] 史碧云[1,2] 张福生[1] 李晓伟[1,2] 耿伟华 杨永 刘会来 秦雪梅[1] 

机构地区：[1]山西大学中医药现代研究中心,山西太原030006 [2]山西大学化学化工学院,山西太原030006 [3]保定赛行阿胶有限公司,河北保定071404

出　　处：《中草药》2013年第3期354-358,共5页Chinese Traditional and Herbal Drugs

基　　金：国家自然科学基金项目(81102833);山西省基础研究项目(2012021031-2);山西省中药材;中药饮片地方标准研究(2011012A)

摘　　要：目的建立驴皮药材RAPD分析方法并用于伪品马皮的鉴别。方法采用化学试剂盒法确定了驴皮药材中DNA提取的最佳条件,采用L16(45)正交设计方法,针对Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物设计了5因素4水平的正交试验,优化了RAPD-PCR反应条件。结果驴皮药材RAPD-PCR反应体系的最佳条件为25μL反应体系中含有Taq酶1.5 U、Mg2+0.15 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、模板DNA 1.5μL、引物0.5μmol/L;PCR反应条件为95℃预变性5 min,94℃变性30 s,37℃退火30 s,72℃延伸1 min,共30个循环,最后72℃延伸7 min。RAPD反应结果中300～400 bp处的条带可作为鉴别驴皮及其伪品的特异性条带。结论所建立的RAPD分析方法具有简便快捷、稳定性好、重现性高的特点,可用于驴皮药材及其伪品马皮的鉴别。

关 键 词：驴皮 RAPD-PCR分析 正交设计 DNA分子标记 伪品鉴别 

分 类 号：R282.32[医药卫生—中药学]