无需逆转录的高通量多重呼吸道病毒RNA检测技术的建立  

Establishment of a High-throughput Respiratory Viruse Detection Technology without RNA Purification and Reverse Transcription

作　　者：杨丹丽[1] 田晓怡[1] 石伟先[2] 郑直[1] 

机构地区：[1]中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系,北京100005 [2]北京市疾病预防控制中心传染病地方病控制所,北京100013

出　　处：《中国医学科学院学报》2013年第1期24-28,共5页Acta Academiae Medicinae Sinicae

基　　金：国家自然科学基金(30872412)~~

摘　　要：目的建立一种无需逆转录等复杂样品前处理步骤,只需简单样品裂解便可同时检测多种呼吸道病毒RNA的高通量核酸检测系统,为大规模流行病学监测提供新的技术手段。方法直接以裂解液中病毒RNA作为检测靶标,利用夹层杂交信号放大技术,结合以Luminex微球为基础的多指标同步分析(xMAP)多重检测平台,对一个样品同时检测A和B型流感病毒、A和B型呼吸道合胞病毒、1、2和3型副流感病毒,及偏肺病毒等8种病毒的靶标RNA,可一次实验并行检测96个样品。对该高通量检测系统进行了特异性、灵敏度评价。结果该检测方法可以特异性区分8种病毒的RNA靶标分子,检测下限均低于或等于4695个RNA拷贝。结论初步建立了可靠、灵敏、操作简便、高通量的多种呼吸道病毒RNA并行检测方法,为进一步实现在临床呼吸道样品中高通量检测呼吸道病毒提供了技术基础。Objective To establish a convenient and high-throughput respiratory virus detection method to facilitate epidemiological viral monitoring. Methods We used high-throughput microsphere-based flexible multi-analyte profiling teehndogy （xMAP） coupled with signal amplification molecules to simultaneously detect RNAs of 8 viruses including influenza viruses A and B, parainflnenza viruses type 1, 2 and 3, respiratory syncytial viruses A and B, and metapneumovirus in a 96-well plate format. The sensitivity and specificity of the method for the synthetic viral RNAs were evaluated. Results There was no cross-reactivity among the 8 respir- atory viral target RNAs. The detection limits for the 8 viral in intro-transcribed RNAs ranged from 1204 to 4695 RNA copies. Conclusion We establish a sensitive, specific, convenient, and high-throughput multiplex detection method suitable for detecting muhiple respiratory viral RNAs for epidemiological viral monitoring.

关 键 词：呼吸道病毒 体外转录RNA 多指标同步分析技术 信号放大 

分 类 号：R-331[医药卫生]