OPTC-shRNA干扰对牛玻璃体细胞与视网膜色素上皮细胞共培养胶原凝胶收缩系统的影响  

The effect of OPTC-shRNA on the bovine retinal pigment epithelial cells and hyalocytes co-culture collagen gel contraction system

作　　者：马进[1] 欧会林[2] 朱铁培[3] 

机构地区：[1]中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室,广州510060 [2]浙江大学医学院附属第二医院眼科中心 [3]温州医学院附属眼视光医院杭州院区

出　　处：《中华眼科杂志》2013年第2期155-162,共8页Chinese Journal of Ophthalmology

基　　金：卫生部科学研究基金-浙江省医药卫生重大科技计划（WKJ2011-2-006）;浙江省科技厅公益类项目（2011C23090）

摘　　要：目的探讨抑制opticin蛋白表达对牛玻璃体细胞与视网膜色素上皮（RPE）细胞共培养胶原凝胶收缩系统的调控作用。方法实验研究。设计并转染OPTC-shRNA质粒至体外培养的牛RPE细胞，通过免疫印迹法检测转染后3、5、7dopticin蛋白的相对表达量和抑制率。在牛I型胶原凝胶内加入牛玻璃体细胞和RPE细胞，构建细胞共培养的胶原凝胶体外收缩模型。实验共分为6组：OPTC-shRNA质粒转染RPE及玻璃体细胞组（A组）、空质粒转染RPE及玻璃体细胞组（B组）、未转染RPE及玻璃体细胞组（c组）、仅含未转染RPE细胞组（D组）、仅含玻璃体细胞组（E组）以及不含任何细胞空白对照组（F组）。应用One—wayANOVA、SNK-q检验和单因素回归分析比较各组凝胶收缩差异，并分析A、B、C组玻璃体细胞数的差异对胶原凝胶收缩性状的影响。结果成功构建并转染了有显著抑制作用的OPTC—shRNA质粒至牛RPE细胞。免疫印迹法检测结果显示，opticin蛋白表达抑制率在转染后3、5、7d分别为（83．91±2．88）、（84．71±4．27）、（82．85±2．72）％，差异无统计学意义（F=1．15，P〉0．05）。胶原模型构建后3d，A、B、C组中不同密度（2×10^7、1×10^8、5×10^8个／L）亚组玻璃体细胞密度凝胶收缩率分别为A组：（23．52±2．08）、（56．00±1．02）、（61．62±1．73）％；B组：（16．56±2．01）、（36．41±1．33）、（49．56±1．75）％；C组：（15．75±1．37）、（37．45±1．14）、（48．45±1．97）％，D、E组凝胶收缩率分别为（12．18±0．95）、（10．95±0．93）％，F组未观察到凝胶收缩。在相同玻璃体细胞密度下A、B、C组间凝胶收缩性两两比较，2×10^7个／L细胞密度：A组与B组、A组与C组间差异有统计学意义（q=11．38、12．72，P值均〈0．05）；B组与C组间差异无统计学意义（q=1．34，P〉0．05）；1×10^8个／L细胞密度�Objective To investigate the OPTC-shRNA inhibiting effect on the opticin expression by the bovine hyalocytes and retina pigment epithelial （RPE） cells co-culture collagen gel contraction system. Methods Experimental study. The OPTC-shRNA expression vector was designed and transfected into bovine RPE cells cultured in vitro. The relative expression and the inhibition rate of the opticin protein were measured by Western blot on days 3,5 and 7. An in vitro cells co-culture bovine type I collagen gel contraction assay was constructed consisting of the hyalocytes and RPE cells. Six groups were established in this experiments： OPTC-shRNA plasmid transfected RPE cells and hyalocytes （group A）, empty plasmid transfected RPE cells and hyalocytes（ group B）, non-transfected RPE cells and hyalocytes （group C）, non- transfected RPE cells （ group D ）, only hyalocytes （ group E ）, and no cells （ group F ） . The collagen gel contractile activities of these groups were compared by One-way ANOVA, SNK-q tests and regression analysis ;and the influence of the hyalocytes density variance on the collagen gel contraction in groups A, B and C were also analyzed. Results The OPTC-shRNA expression vector with significant inhibition effect was constructed and transfected into bovine RPE cells successfully. The results of Western blot analysis showed that the inhibitory rates on the opticin expression on days 3,5 and 7 were （ 83.91 ± 2. 88 ）, （ 84. 71 ± 4. 27 ） and （ 82. 85 ± 2. 72） % , respectively. Furthermore, the differences among days 3,5 and 7 were insignificant（ F = 1.15 ,P 〉 0. 05 ）. On day 3, the gel contraction rates for the sub-groups with various hyalocytes densities （2 × 10^7 ,1× 10^8 and 5 ×10^8/L） in groups A,B and C were：group A： （23.52 ±2. 08）, （56.00 ± 1.02）, （61.62 ± 1.73）% ;group B： （ 16. 56 ±2.01）, （36.41 ± 1.33）, （49. 56 ± 1.75）% ;group C： （ 15.75 ± 1.37）, （37.45 ± 1.14）, （48. 45 ± 1.97）%. The gel contraction

关 键 词：蛋白聚糖类 细胞外基质蛋白质类 RNA干扰 玻璃体 色素上皮 眼 

分 类 号：R776.4[医药卫生—眼科] R774.1[医药卫生—临床医学]