5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及机制  

Inhibitory effect on 5-Aza-2 ＇ -deoxycytidine on proliferation of human colon cancer cells and mecha-ni^m

作　　者：舒宁波[1] 王亚旭[1] 曾令海[1] 谢凯[1] 张灵敏[1] 毕德利[1] 

机构地区：[1]重庆医科大学附属第二医院胃肠外科,重庆400010

出　　处：《中华实验外科杂志》2013年第3期452-454,共3页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：重庆市科委自然科学基金资助项目（cstc2012jjA10063）

摘　　要：目的观察5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人结肠癌细胞（SW480）株增殖凋亡的影响并探讨其机制。方法以2．5、5．0、10．0μmol／L的5-Aza—CdR作用于SW480细胞72h后，采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率；甲基化测序聚合酶链反应（BSP）检测Disable一2（DAB2）胞嘧啶一磷酸一鸟嘌呤基序（CpG）岛的甲基化状态；逆转录一聚合酶链式反应（RT—PCR）检测DAB2mRNA的表达；激光共聚焦显微镜检测DAB2蛋白的表达。结果（1）5-Aza．CdR对SW480细胞生长有抑制作用，用药处理后细胞凋亡率分别为（12．89±0．59）％、（16．74±1．80）％、（33．02±3．30）％，（P〈0．01）；（2）5-Aza—CdR处理前甲基化程度为89．09％，处理后依次为70．00％、55．45％、10．91％，肩动子甲基化水平明显降低（P〈0．01）；（3）5-Aza—CdR处理前RT—PCR可以少量扩增出DAB2mRNA特异性条带（平均灰度比值为0．266±0．013），5-Aza—CdR处理后可见DAB2mRNA转录水平增加，且mRNA水平与药物的浓度呈正相关，平均灰度比值2．5p．mol／L组为0．363±0．009，5．μmol／L组为0．490±0．021；10．0Ixmol／L组为0．753±0．028（P〈0．01）；（4）5-Aza—CdR处理前有少量DAB2蛋白表达于细胞质及细胞核中（荧光强度为：94．50±13．39），予以5-Aza—CdR处理之后DAB2的表达量增加（荧光强度为：123．75±15．19，P〈0．01）。结论5-Aza—CdR能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的作用，其机制可能是5-Aza．CdR能逆转SW480细胞DAB2启动子CpG岛的异常甲基化．诱导mRNA转录和蛋白的表诀．Objective To explore the effects 5-Aza-2＇-deoxycytidine （5-Aza-CdR） on prolifera- tion and apoptosis of human colon cancer cell line （SW480） , and the action mechanism. Methods The SW480 cells were treated with 5-Aza-CdR at concentrations of 2. 5, 5.0, 10.0 μmol/L for 72 h. The ap- opt0sis rate was detected by using flow cytometry （FCM）. Disable-2 （DAB2） methylation levels of the CpG island were determined by using Bisulfite sequencing polymerase chain reaction （BSP）. DAB2 mRNA expression levels were detected by using reverse transcription-polymerase chain reaction （ RT-PCR）, and the expression of DAB2 protein by using laser confocal microscopy. Results （ 1 ） The apoptosis rate in 5- Aza-CdR-treated groups [（12. 89 ±0. 59）%, （ 16. 74 ± 1.80）%, and （33.02 _＋3.30）% ] was signifi- candy higher than in control group （P 〈 0. 01 ） ; （2） DAB2 promoter methylation level was 89.09% before the treatment with 5-Aza-CdR. After treatment with 5-Aza-CdR for 72 h, methylation level was 70. 00% , 55.45%, and 10. 91% respectively （ P 〈 O. 01 ） ; （ 3 ） Before 5-Aza-CdR treatment, DAB2 mRNA was slightly amplified （average gray ratio was 0. 266±0. 013 ） , whereas it could be dramatically increased after the treatment. The mRNA expression level of DAB2 expressed as average gray ratio was 0. 363±0. 009, 0. 490±0. 021 and 0. 753±0. 028 respectively after treatment with 2. 5, 5.0 and 10. 0 Ixmot/L 5-Aza-CdR （ P 〈 O. 01 ） ; （ 4 ） Before＇ treatment with 5-Aza-CdR, a little DAB2 protein （ fluorescence intensity was 94. 50±13.39） was detected in cytoplasm and nucleus, but the protein expression of DAB2 was signifi- cantly increased （fluorescence intensity was 123.75 ±15.19 ） after the treatment with 5-Aza-CdR （P 〈 O. 01 ）. Conclusion 5-Aza-CdR can induce the apoptosis of SW480 cells probably by reversing the abnor- mal methylation of DAB2 CpG island, and promoting the expression of DAB2 RNA and protein.

关 键 词：结肠癌 5-杂氮-2’-脱氧胞苷 甲基化 脱噬作用 

分 类 号：R735[医药卫生—肿瘤]