人单核细胞趋化因子-1基因重组卡介苗的构建与鉴定  

作　　者：李杜渐[1] 徐耀庭[1] 韦芳[2] 李惠明[2] 黄汝强[1] 许晓文[1] 顾炜[1] 顾伟平[1] 

机构地区：[1]上海市第一人民医院分院泌尿外科,上海200081 [2]上海交通大学附属上海市第一人民医院实验中心,上海200080

出　　处：《现代泌尿外科杂志》2013年第2期195-197,共3页Journal of Modern Urology

基　　金：上海市卫生局课题经费资助项目(No.2007037);上海市虹口区卫生局课题经费资助项目(No.0703-01)

摘　　要：目的构建能自动分泌性表达单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的重组卡介苗。方法分别以卡介苗(BCG)和人MCP-1cDNA为模板,通过PCR扩增得到120bp的BCG Ag85B信号肽基因序列和300bp的MCP-1基因序列。将上述两片段基因序列插入大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMV261-Ag85B-MCP-1。测序鉴定完毕后,用电穿孔法将该重组质粒导入BCG中,构建重组卡介苗rBCG MCP-1。分别应用PCR扩增和Western blot检测rBCG MCP-1中MCP-1的基因和蛋白的表达。结果质粒pMV261-Ag85BMCP-1用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实克隆基因BCGAg85B信号肽和MCP-1正确插入载体pMV261。Western blot显示rBCG MCP-1的培养上清和菌体中均可检测到MCP-1蛋白的表达。ELISA法可检测到培养上清中有高表达的MCP-1蛋白(340pg/mL)。结论成功构建了能分泌MCP-1的新型重组卡介苗rBCG MCP-1,为进一步研究其抗膀胱肿瘤的疗效打下了基础。

关 键 词：卡介苗 单核细胞趋化因子-1 膀胱肿瘤 基因重组 

分 类 号：R737[医药卫生—肿瘤]