MDA-MSP技术检测粪便miR34b/c甲基化及其在结直肠癌早期诊断中的意义  

Clinical significance of detection of stool miR34b/c methylation by MDA-MSP in patients with colorectal cancer

作　　者：张丰云[1] 管静芝[2] 赵慧霞[3] 李秋文[3] 董伟伟[3] 段昕妤[3] 朱建华[3] 王如良[3] 郝怡鑫[3] 叶明[3] 肖文华[3] 

机构地区：[1]中国人民解放军第四军医大学西京医院肿瘤科,陕西省西安市710032 [2]中国人民解放军第309医院肿瘤科,北京市100091 [3]中国人民解放军总医院第一附属医院肿瘤科,北京市100048

出　　处：《世界华人消化杂志》2013年第8期724-728,共5页World Chinese Journal of Digestology

基　　金：解放军总医院苗圃基金资助项目;No.09KMM30~~

摘　　要：目的:探讨粪便miR34b/c甲基化状态的检测在结直肠癌早期诊断中的意义.方法:从126例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织、粪便和64例正常对照者的粪便中分别提取DNA,采用多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)技术对经过亚硫酸氢盐修饰样本进行全基因组扩增,结合甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测组织和粪便中miR34b/c基因甲基化状态.结果:结直肠癌癌组织miR34b/c基因的甲基化阳性率为95.2%(120/126),对应的癌旁正常组织为11.9%(15/126),两者比较有显著差异(P<0.01);miR34b/c甲基化状态与各临床病理参数无显著相关(P>0.05).结直肠癌粪便miR34b/c甲基化阳性率为90.2%(111/123),显著高于正常对照7.8%(5/64),差异有统计学意义(P<0.01).粪便DNAmiR34b/c用于结直肠癌早期诊断的敏感性为91.2%,特异性为92.2%.结论:miR34b/c甲基化是结直肠癌的重要分子特征,检测粪便miR34b/c甲基化有望成为结直肠癌早期诊断的一个全新的肿瘤标志物.MDA结合MSP为miRNA的甲基化分析提供了一种较理想的研究手段.AIM： To investigate the value of detection of stool miR34b/c methylation in the diagnosis of colorectal cancer. METHODS： Multiple displacement amplification （MDA） was used to amplify bisulfite modi- fied genomic DNA, and methylation-specific PCR （MSP） was used to analyze methylation of miR34b/c in colorectal cancer tissue and stool DNA from 126 patients with colorectal cancer and stool DNA in 64 patients with benign diseases. RESULTS： In 126 cancer specimens and matched tumor-adjacent tissue specimens, 95.2% （120/126） and 11.9% （15/126） showed methylation of miR34b/c, and there is a signifi- cant difference in the rate of methylation be- tween them （P 〈 0.01）. There was no significant correlation between methylation of miR34b/c and clinicopathologic parameters （all P 〉 0.05）. The rate of methylation of miR34b/c in stool DNA was significantly higher in cancer patients than in patients with benign disease （90.2% vs 7.8%, P 〈 0.01）. The sensitivity and specificity of detection of miR34b/c methylation in diagnosis of colorectal cancer were 90.2% and 92.2%, re- spectively. CONCLUSION： The hypermethylation of miR34b/c is frequent in colorectal cancer and may be used as a novel diagnostic biomarker for colorectal cancer. MDA and MSP techniques provide ideal tools for analysis of methylation in trace DNA samples.

关 键 词：miR34b c 甲基化特异性PCR 多重置换扩增 粪便 

分 类 号：R735.3[医药卫生—肿瘤]