猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用  

作　　者：宋建领[1] 高华峰[1] 信爱国[1] 孙强[1] 王娟[1] 李华春[1] 

机构地区：[1]云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明650224

出　　处：《畜牧与兽医》2013年第5期71-74,共4页Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：云南省后备人才基金项目(2009CI061);云南省农业科技创新工程项目(2008LA019);云南省现代农业生猪产业技术体系建设项目

摘　　要：根据GenBank登录的猪肺炎支原体黏附素P97基因(U50901)序列,设计1对特异性引物和1条探针,优化了猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法。25μL反应体系,引物MhpF/MhpR(20μmol/L)各0.5μL,探针MhpP(20μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间的线性相关系数为0.997。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异地检测猪肺炎支原体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、乙型脑炎病毒,猪细小病毒、猪圆环病毒等病原检测无交叉反应;针对猪肺炎支原体阳性质粒标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数在0.78%～1.16%之间。用建立的实时荧光定量PCR检测方法,对40份临床样品检测,结果表明肺脏拭子与肺脏悬液阳性率完全一致,而鼻腔拭子检出率较低。

关 键 词：猪肺炎支原体 荧光定量PCR DNA标准品 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]