miR-135a对卵巢上皮性癌细胞中HOXA10基因表达及细胞增殖和凋亡的影响  

Effects of miR-135a on HOXA10 expression, proliferation and apoptosis of ovarian cancer cells

作　　者：汤伟伟[1] 万贵平[3] 万一聪[2] 张林[2] 程文俊[2] 

机构地区：[1]江苏省中西医结合医院妇产科,南京210028 [2]南京医科大学第一附属医院妇科,210029 [3]江苏省中西医结合医院妇产科

出　　处：《中华妇产科杂志》2013年第5期364-369,共6页Chinese Journal of Obstetrics and Gynecology

基　　金：国家自然科学基金（81272871）;江苏省自然科学基金面上项目（BK2010576）;江苏省六大人才高峰培养项目（303070774IB09）;江苏省医学重点人才培养项目（苏卫科教[2011]15号）

摘　　要：目的研究微小RNA-135a（miR-135a）对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系SKOV3细胞中HOXAIO基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法（1）应用生物信息学技术预测与miR-135a高度相关的靶基因（即HOXAIO基因）。（2）将miR-135a成熟体模拟物（mimics）、miR-135a成熟体抑制物（inhibitor）及阴性对照分别转染SKOV3细胞，采用逆转录（RT）-PCR技术和蛋白印迹法检测转染不同时间（分别为24、48和72h）后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA和蛋白的表达水平。（3）报告基因实验验证miR-135a对HOXAIO基因表达的调节作用，采用含miR-135a的质粒和含HOXAIO基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞，以转染微小RNA（mirRNA）慢病毒质粒者为对照。（4）采用四甲基偶氮唑蓝（MTI＇）比色法检测转染不同时间（分别为24、48和72h）后SKOV3细胞的增殖能力[以吸光度（A）值表示]，蛋白印迹法检测转染48h后SKOV3细胞中凋亡相关蛋白[包括bel-2、bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（（3aspase-3）]的表达。结果（1）生物信息学技术预测，得出与miR-135a高度相关的靶基因为HOXAIO基因。（2）RT—PCR技术检测显示，随着转染时问的延长（分别为24、48和72h），mill-135amimics转染后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA的表达水平（分别为0．94±0．04、0．78±0．03、0．70±0．03）逐渐降低（P〈0．05）；miR-135ainhibitor转染后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA的表达水平（分别为1．14±0．05、1．16±0．03、2．60±0．08）逐渐升高（P〈0．05）；且两者转染48及72h后，分别与阴性对照（为1．00）比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。蛋白印迹法检测显示，转染不同时间后SKOV3细胞中HOXAIO蛋白的表达水平与HOXAIOmRNA的变化一致。（3）报告基因实验显示，含miR一135a的质粒和含HOXAIO基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞后，与对照比较，其荧光素酶活性下降了67．8％（P〈0．01）。（4）MObjective To investigate the effects of miR-135a on HOXA10 expression, proliferation and apoptosis of SKOV3 cells. Methods （ 1 ） Through computer-aided algorithms, the predicted target gene of miR-135a （HOXA10）were detelanined. （2） miR-135a mimics, miR-135a inhibitor and negative control were transfected into SKOV3 cells, respectively. Reverse transcription （RT）-PCR, western blot analysis were used to examine the expression levels of HOXA10 at different times （24, 48 and 72 hours）. （3） A luciferase reporter assay was used to confirm the direct regulation between miR-135a and HOXA10. （4） SKOV3 cells proliferation at different times （24,48 and 72 hours ） was detected by methyl thiazolyl tetrazolium（MTT） assay [ quantified by absorbance（A）]. Western blot was used to examine the expression of apoptosis-associated protein bcl-2, bax and easpase-3 in SKOV3 cells after 48 hours transfection. Results （1） HOXA10 was predicted to be the target gene of miR-135a by computer-aided algorithms. （2） RT-PCR shown that HOXA10 mRNA levels were decreased over time （24, 48 and 72 hours） after miR-135a mimics transfectionin SKOV3 cells （0.94 ± 0.04 vs 0.78 ±0.03 vs 0.70 ± 0.03, P 〈0.05）.While, the expression of HOXA10 mRNA was increased over time ＇after miR-135a inhibitor transfection （ 1.14 ± 0. 05 vs 1.16 ±0. 03 vs 2.60 ±0. 08 ,P 〈0. 05）. After transfeeted with miR-135a mimics or miR-135a inhibitor over 48 and 72 hours, the HOXAI0 expression levels in SKOV3 cells were significantly lower or higher than each control group, respectively （ all P 〈 0. 01 ）. Western blot analysis of HOXA10 expression in SKOV3 cells confirmed the results of RT-PCR detected. （3） After cotransfection of miR-135a plasmid and pMIR-REPORT luciferase plasmid containing HOXA10, luciferase reporter assays showed that the luciferase activity reduced by 67.8% （P 〈0. 01）. （4） MTT showed that SKOV3 cells growth after miR-135a mimics transfection for 48 and 72 hours were signif

关 键 词：微RNAS 卵巢肿瘤 细胞系 肿瘤 同源盒结构域蛋白质类 细胞增殖 细胞凋亡 

分 类 号：R737.31[医药卫生—肿瘤]