人α-防御素对人内皮细胞ECV304氧化低密度脂蛋白能力的影响及其机制的实验研究  

Impact and potential mechanism of human ot-defensin 1 on low-density lipoprotein oxidation ability of ECV304 cells

作　　者：许程洁[1] 王京伟[1] 宋健[1] 武军驻[1] 宋婷婷[1] 

机构地区：[1]武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系,430071

出　　处：《中华心血管病杂志》2013年第5期406-410,共5页Chinese Journal of Cardiology

基　　金：国家自然科学基金资助项目（81170273）

摘　　要：目的探讨人仅-防御素（human α-defensin，HNP）-1对人内皮细胞氧化低密度脂蛋白（10wdensitylipoprotein，LDL）的影响及其可能机制。方法实验设HNP-1转染组（HNP-1转染的内皮细胞ECV304），siRNA十扰组（siRNA干扰抑制HNP—l表达的ECV304）和HNP-1刺激组（10μg/mlHNP-1刺激的ECV304），并分别设有正常ECV304作为对照组，均经LDL处理3h后检测脂质氧化产物丙二醛（MDA）、蛋白氧化产物PCO（proteincarbonyl，PCO）的生成量。分别采用流式细胞仪、荧光显微镜检测经LDL、脂多糖（LPS）、HNP-1预处理的ECV304（分别为LDL组、LPS组、HNP-1刺激组）和过表达HNP-1的ECV304（HNP-1转染组）中氧自南基的生成量，另设正常ECV304作为对照组。结果（1）MDA和PCO生成量检测结果：HNP-1刺激组、HNP-1转染组MDA生成量均明显高于其相应的对照组1分别为（14．494-1．10）比（9．474-1．18）nmol／mg蛋白和（4．214-0．03）比（3．154-0．02）nmol／mg蛋白，P均〈0．05]。siRNA干扰组MDA生成量则明显低于其对照组f（3．76±0．48）比（4．544-0．28）nmol／mg蛋白，P〈0．05]。HNP—l转染组PCO生成量明显高于对照组和siRNA干扰组（P均〈0．05），且siRNA干扰组较对照组低，但差异无统计学意义。（2）氧自由基水平检测结果：HNP-1刺激组和HNP-1转染组ECV304内氧自由基水平均较LDL组、LPS组及对照组高（P均〈0．05）。结论HNP-1可增强人内皮细胞ECV304氧化LDL的能力，机制可能与提高氧自由基的表达水平有关．．Objective To explore the role and potential mechanism of human a-defensin 1 （HNP-1） on low-density lipoprotein （LDL） oxidation ability of human endothenial cells （EVC304）. Methods Post incubation with LDL for 3 h, the malondiadehyde （MDA） and protein carbonyl （PCO） were detected in untreated ECV304 （control） and in HNP-1 transfected ECV304 in the presence and absence of siRNA against HNP-I. Flow cytometry and fluorescence microscopy were used to detect the generation of oxygen free radieal in the ECV304 which have been pretreated by LDL, LPS and HNP-1, respectively. Result Compared with control group, MDA level was significantly increased in HNP-1 transfeeted[ （4.21 - 0.03 ） vs. （3. 15 _＋ 0. 02） nmol/mg ~ pro~ or ira HNP-lstimulated ECV304 cells I （14.49 ＋ 1. l0 ） vs. （9. 47 ＋ 1. 18 ） mnol/mg ~ pro ], which could be significantly downregulated by siRNA [ （ 3.76 ＋ 0. 48 ） vs. （ 4. 54 ＋ 0. 28 ） nmol/mg ~ pro, all P 〈 0. 05 1 ~ PCO was also significantly increased in HNP-1 transfected ECV304 cells. The levels of free radical were significantly increased in HNP-1 transfeeted or HNP-I stimulated ECV304 cells. Conclusion HNP-1 can enhance the LDL oxidation ability of human endothelial cells via promoting the generation of free radicals.

关 键 词：动脉粥样硬化 内皮细胞 仪防御素 活性氧 脂蛋白类 LDL 

分 类 号：R[医药卫生]