芝田硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达  

CLONING AND EXPRESSION OF THE GENE ENCODING MALTOOLOGOSYL TREHALOSE SYNTHASE FROM SULFOLOBUS SHIBATAE IN E.COLI

作　　者：陈炜[1] 刘莉[1] 孙培钰[1] 金城[2] 

机构地区：[1]中国科学院微生物研究所,酶学研究室,北京100080 [2]中国科学院微生物研究所,微生物资源国家重点实验室,北京100080

出　　处：《微生物学报》2000年第1期57-61,共5页Acta Microbiologica Sinica

基　　金：北京市自然科学基金;微生物资源国家重点实验室课题

摘　　要：用ＰＣＲ 方法从芝田硫化叶菌中扩增了编码一种新酶，即麦芽寡糖基海藻糖合酶（ ＭＴＳａｓｅ） 的基因，扩增的２－２ｋｂ ＤＮＡ 插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０ 中，构建成重组质粒ｐＳＢＧＴ１ 。ｐＳＢＧＴ１ 中ＭＴＳａｓｅ 基因在大肠杆菌中得到表达。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析表达产物ＭＴＳａｓｅ蛋白的分子量约为７４ｋＤａ ，同核苷酸序列测定所推导的值相符。表达产物占细胞总蛋白约４－４ ％ 。ｐＳＢＧＴ１ 产生的重组酶作用于淀粉部分水解物，使ＤＥ 值降低，得到非还原糖或低还原糖。kb DNA fragment encoding a novel enzyme, maltooligosy1 trehalose synthase (MTSase) was amplified from\% Sulfolobus shibatae\% by using PCR technique. The amplified 2.2kb DNA fragment was inserted into an expression vector, pBV220, to yield the recombinant plasmid pSBGT1. MTSase gene in pBSGT1 was expressed in \%E.coli\%. The molecular weight of expressed MTSase detected by SDS\|PAGE was about 74kD, which is conformed with that deduced from nucleotide sequence. The expressed MTSase protein accounted for about 4.4% of the total cell protein. The MTSase from transformants containing pBSGT1 is capable of decreasing DE value, forming non\|reducing or less\|reducing saccharides when allowed to act on reducing partial starch hydrolysates.

关 键 词：MTSASE 海藻糖 酶法 大肠杆菌 基因克隆 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]